LK-6286 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒

产品简介

该试剂盒提供了一种简便的方法，用于从培养细胞或新鲜组织中分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白。分离后的蛋白可用于多种研究，如Western blot、EMSA、footprinting、报告基因检测及酶活力测定等。

使用说明

1. 准备溶液

   - 将试剂盒中的试剂在室温下解冻溶解，溶解后立即置于冰上并混匀。

   - 在使用前数分钟内，向细胞浆蛋白抽提试剂A和细胞核蛋白抽提试剂中加入PMSF，终浓度为1mM。

2. 处理贴壁细胞

   - 用PBS洗涤细胞，使用细胞刮子或EDTA溶液处理细胞，使其脱离培养皿。

   - 离心收集细胞，尽量吸尽上清，保留细胞沉淀。

3. 处理悬浮细胞

   - 用PBS洗涤细胞，离心收集细胞，尽量吸尽上清，保留细胞沉淀。

4. 细胞浆蛋白抽提

   - 每20ul细胞沉淀加入200ul含1mM PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。

   - 剧烈震荡5秒，冰浴10-15分钟。

   - 加入10微升细胞浆蛋白抽提试剂B，剧烈震荡 5秒，冰浴1分钟。

   - 再次剧烈震荡5秒，4℃ 12000-16000g离心5分钟。

   - 吸取上清至预冷的塑料管中，该上清为细胞浆蛋白。

5. 细胞核蛋白抽提

   - 对于沉淀，完全吸尽残余上清，加入50ul含1mM PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。

   - 剧烈震荡 15-30秒，冰浴中每隔1-2分钟重复震荡，共30分钟。

   - 4℃ 12000-16000g离心10分钟。

   - 吸取上清至预冷的塑料管中，该上清为细胞核蛋白。

6. 处理新鲜组织

   - 将组织切碎，按照20:1的比例混合细胞浆蛋白抽提试剂A和B，并加入PMSF至1mM。

   - 每60mg组织加入200ul混合好的抽提试剂，冰浴中匀浆。

   - 匀浆后冰浴放置15分钟，4℃ 1500g离心5分钟。

   - 吸取上清，该上清为部分细胞浆蛋白。

   - 对于沉淀，按照步骤4-5操作，抽提细胞浆蛋白和细胞核蛋白。

保存条件

-20℃保存，有效期12个月。

产品声明
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3.由于科研实验本身存在不确定性和失败风险，对于珍贵样本务必谨慎使用，或者使用前请用普通样本做预实验，确保实验条件和方案成熟，以免对珍贵样本造成不可挽回的浪费和其他实验损失。产品如遇质量问题，售后仅限产品本身，不涉及连带其他任何赔偿。

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