细胞膜红色荧光Dil染色试剂盒,LK-1507

产品简介

DiI（1,1'-二十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐）是一种亲脂性膜荧光探针，具有橙红色荧光特性（最大激发/发射波长549/565 nm），广泛应用于细胞膜标记和示踪研究。该染料可溶于DMSO等有机溶剂，能稳定嵌入细胞膜脂质双层，适用于活细胞或固定细胞的膜标记，在荧光显微镜、共聚焦显微镜和流式细胞术中表现出高信噪比和良好的膜特异性。DiI具有低细胞毒性，染色后可在细胞内长期保留，不仅可用于常规细胞膜成像，还可用于细胞迁移、神经轴突追踪、脂质体标记及细胞间相互作用研究。具有优异的膜结合稳定性、广谱的细胞兼容性（哺乳动物细胞、细菌等）以及与固定方法的兼容性（如4%多聚甲醛固定）。使用时需避光操作，推荐工作浓度为1:100-1:400稀释，并建议根据细胞类型优化染色条件。该染料常与同系列荧光探针（如绿色荧光的DiO、深红色DiD等）配合使用，适用于多色标记实验，-20℃避光保存可长期维持稳定性。

一、溶液配制（以流式样本为例）  

1.1 配制比例表  

1.2 配制步骤  

1. 按顺序混合：先将① DiI与②染色增强剂混匀，再加入③染色缓冲液。  

2. 敏感细胞可用培养液替代缓冲液（可能需延长染色时间）。  

3. DiI终浓度建议在1:100-1:400间优化，染色增强剂用量固定不变。  

二、染色操作步骤（参考）  

2.1 悬浮活细胞染色  

1. 取0.5ml细胞膜染色工作液，重悬细胞至密度为1-2×10⁶/ml。  

2. 37℃避光孵育5-20分钟（首次建议5分钟，后续优化时间）。  

3. 500-1000×g离心5分钟，弃上清。  

4. 加入37℃预热的培养液重悬细胞，重复洗涤2次。  

5. 流式检测或荧光显微镜观察（Ex/Em: 549/565nm）。  

2.2 贴壁活细胞染色  

1. 吸除培养液，用PBS洗涤细胞2次。  

2. 加入适量工作液（如96孔板50-100μl/孔），确保覆盖细胞。  

3. 37℃避光孵育5-20分钟。  

4. 吸除染液，PBS洗涤2-3次，换新鲜培养液观察。  

2.3 固定后细胞/切片染色  

1. 固定：用4%多聚甲醛或免疫固定液处理样本。  

2. （可选）通透：0.1% Triton X-100室温处理10分钟，PBS洗涤3次。  

3. 加入工作液覆盖样本，37℃避光孵育5-20分钟。  

4. PBS洗涤2-3次，封片时仅用PBS（禁用含甘油封片剂）。  

三、注意事项  

1. 避光操作：所有孵育步骤需严格避光。  

2. 浓度优化：首次实验建议设置DiI浓度梯度（1:100、1:200、1:400）。  

3. 洗涤控制：贴壁细胞洗涤时避免用力冲脱细胞。  

4. 固定影响：固定后染色可能需调整通透条件，建议预实验验证。  

四、常见问题 

1. 信号弱：  延长孵育时间至20分钟。  提高DiI浓度（最高1:100）。  

2. 背景高：  增加洗涤次数至3-4次。  降低DiI浓度或缩短孵育时间。  

3. 固定后异常：  尝试跳过通透步骤直接染色。