锌离子比色法检测试剂盒，LK-3607

产品介绍  

锌离子比色法检测试剂盒 用于定量检测生物样本中的锌离子（Zn²⁺）。锌是人体必需的微量元素，参与酶活性调控、蛋白质结构稳定、基因表达及细胞增殖等关键生理过程。锌缺乏可能导致免疫力下降、伤口愈合迟缓、发育异常等疾病。该试剂盒通过的 Zn-620探针 提供了一种简单、快速的比色检测方法，适用于血清、血浆、尿液等生物样本的锌浓度分析，广泛应用于科研和药物研发领域。  

产品特征  

1. 高灵敏度与特异性：检测限低至 1 µM，Zn-620探针与Zn²⁺结合后，在620 nm处吸光度显著增强（>100倍），且对Ca²⁺、Mg²⁺等其他金属离子干扰极小。  

2. 操作简便快速：仅需 5-10分钟孵育，通过酶标仪测定吸光度比值（A610nm/A470nm）即可获得结果，兼容96孔或384孔板。  

3. 预优化试剂体系：包含 Zn-620探针（Component A）、Assay Buffer（Component B） 和 ZnCl₂标准品（Component C），支持直接配制标准曲线（1.56 - 100 µM）。  

4. 灵活应用：适用于多种生物样本（如血清、血浆、尿液），且提供更灵敏的荧光检测版本（检测限0.1 µM）。  

5. 稳定性强：试剂需冷冻保存（<-15°C），避免反复冻融，探针需避光保护以确保稳定性。  
实验方法(仅供参考）

1. 试剂准备  

ZnCl₂标准溶液（1 mM）：将10 µL的100 mM ZnCl₂标准溶液（Component C）加入990 µL的Assay Buffer（Component B）中，混匀。  

ZnCl₂标准曲线溶液（100 µM - 1.56 µM）：  

 取100 µL的1 mM ZnCl₂标准溶液，加入900 µL Assay Buffer，得到100 µM ZnCl₂标准溶液（Zn1）。  

对Zn1进行1:2连续稀释（每次取100 µL前一次稀释液加入100 µL Assay Buffer），得到Zn2-Zn7（浓度依次为50 µM、25 µM、12.5 µM、6.25 µM、3.125 µM、1.56 µM）。  

工作溶液：将25 µL Zn-620™（Component A）加入5 mL Assay Buffer（Component B）中，混匀。

2. 样品准备  

测试样品需用Assay Buffer稀释至1.56 - 100 µM范围内。细胞和组织样本请使用试剂盒的专用裂解液裂解。

细胞收集后，无钙镁PBS清洗2次，加入裂解液冰上裂解30分钟，4℃离心12000rpm，5分钟，取上清检测，如果检测值过大，请稀释。

组织剪碎成小块，用玻璃匀浆器匀浆无明显组织结构，加入裂解液冰上裂解30分钟，4℃离心12000rpm，5分钟，取上清检测，如果检测值过大，请稀释。

其他细胞器锌离子检测：请提前分离好所需细胞器，加入裂解液冰上裂解30分钟，4℃离心12000rpm，5分钟，取上清检测，如果检测值过大，请稀释。

3. 实验步骤  

96孔板布局：  

  每孔加入50 µL ZnCl₂标准溶液（Zn1-Zn7）、空白对照（BL，Assay Buffer）或测试样品（TS）。  

  每孔再加入50 µL Zn工作溶液，总体积为100 µL/孔。  

  对于384孔板，每孔加入25 µL试剂，总体积为50 µL/孔。  

反应条件：室温避光孵育5-10分钟。  

检测：用酶标仪测定吸光度比值（A610nm/A470nm）。

计算方法

1. 标准曲线绘制  

以ZnCl₂标准溶液的浓度（1.56 µM - 100 µM）为横坐标，对应的吸光度比值（A610nm/A470nm）为纵坐标，绘制标准曲线（通常为线性或对数关系）。

2. 样品浓度计算  

根据样品的吸光度比值，从标准曲线中插值计算出对应的Zn²⁺浓度。  

若样品经过稀释，需乘以稀释倍数得到原始浓度。

3. 数据处理示例  

假设某样品的吸光度比值为0.8，标准曲线方程为 y = 0.01x + 0.1 （y 为吸光度比值，x 为浓度）：  

     0.8 = 0.01x + 0.1   

     解得 x = 70 uM 。  

若样品稀释了10倍，则原始浓度为70μM×10=700μM。

注意事项  

1.所有试剂需室温解冻后使用，避免反复冻融。  

2.孵育时需避光，以防探针降解。  

3.使用透明底微孔板，确保吸光度检测准确。  

4.若结果异常，检查标准曲线线性（R² ≥ 0.98）及样品是否在检测范围内（1.56 - 100 µM）。  

产品声明
1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.我公司所有产品仅限科学研究实验使用，严禁其他用途，因用于其他用途引起的人身财产安全事故，本公司概不负责。

3.由于科研实验本身存在不确定性和失败风险，对于珍贵样本务必谨慎使用，或者使用前请用普通样本做预实验，确保实验条件和方案成熟，以免对珍贵样本造成不可挽回的浪费和其他实验损失。产品如遇质量问题，售后仅限产品本身，不涉及连带其他任何赔偿。

4.介于科研实验的样本类型复杂性，实验因素多样性，本产品提供的产品说明书仅供参考，如所需实验与本说明书提供的实验信息不一致，请自行查阅文献。

 数据参考

人体不同细胞和组织的锌离子浓度  

锌离子（Zn²⁺）在人体内分布广泛，但浓度因细胞类型、组织功能和代谢需求而异。以下是主要组织和细胞中的典型锌浓度范围（单位：µM，部分为µg/g湿重或干重）：

1. 血液与体液  

-血清/血浆：12–18 µM（健康成人），游离Zn²⁺仅占约0.1%（~0.01 µM），其余与白蛋白（80%）、α₂-巨球蛋白等结合。  

-红细胞：~200–400 µM（主要与碳酸酐酶、金属硫蛋白结合）。  

-尿液：0.1–0.7 µM（排泄量受饮食和肾功能调节）。  

2. 中枢神经系统  

-脑组织：  

  -灰质：~50–150 µM（突触小泡中浓度更高，参与神经递质释放）。  

  -海马区：~100–300 µM（与学习记忆相关，Zn²⁺在突触中富集）。  

-脑脊液（CSF）：0.1–0.5 µM（游离Zn²⁺极低）。  

3. 内分泌与生殖系统  

-胰腺β细胞：~20–50 µM（胰岛素合成与分泌需锌）。  

-前列腺：~500–3000 µg/g干重（全人体最高，精液中Zn²⁺浓度达~2–4 mM）。  

-睾丸/卵巢：~50–200 µM（参与性激素合成）。  

4. 肝脏与免疫系统  

-肝脏：~30–100 µM（金属硫蛋白储存锌，解毒时释放）。  

-免疫细胞：  

  -巨噬细胞：吞噬后溶酶体中Zn²⁺可达1–5 mM（杀菌作用）。  

  -T细胞：活化时胞内Zn²⁺升高至~50–200 µM（信号传导）。  

5. 其他组织  

-肌肉：~50–150 µM（与金属酶如超氧化物歧化酶结合）。  

-骨骼：~100–200 µg/g干重（羟基磷灰石中整合Zn²⁺）。  

-皮肤：~20–80 µM（伤口愈合时局部Zn²⁺浓度升高）。  

检测注意事项  

1.样本类型：不同组织需针对性前处理（如匀浆、酸消化）以释放结合态锌。  

2.动态范围：试剂盒（如AAT 19001）检测限1 µM，适合血清/尿液；高锌组织（如前列腺）需稀释。  

3.生理波动：锌浓度受饮食、昼夜节律、炎症状态影响，需对照标准化。  

以上数据来自文献报道值（*J. Trace Elem. Med. Biol.*, *Metallomics*等），可能存在方法学差异,请实验前严格查阅相关文献，或者做预实验检测样本浓度范围，以免对样本造成不可挽回的损失。