L-乳酸（LA）比色法测试盒，LK-1523

产品介绍

本试剂盒适用于检测血清（浆）、细胞上清、组织、细胞等样本中乳酸的含量。通过比色法原理，能够快速、准确地测定样本中的乳酸浓度，为科研实验提供可靠的数据支持。

产品特点

1. 高灵敏度：检测灵敏度可达0.10 mmol/L。

2. 宽检测范围：线性范围为0.12-7.0 mmol/L，适用于多种样本类型。

3. 操作简便：试剂盒提供完整的试剂和操作步骤，实验流程简单易行。

4. 稳定性好：试剂在2-8℃条件下可保存6个月，性能稳定。

5. 高回收率：平均回收率为105%，结果准确可靠。

产品规格

- 规格1：48T（32 samples）

- 规格2：96T（80 samples）

检测原理

以氧化型辅酶I（NAD+）为氢受体，乳酸脱氢酶（LDH）催化乳酸脱氢产生丙酮酸，使NAD+转化为还原型辅酶I（NADH）。N-甲基吩噻甲基硫酸盐（PMS）递氢使氯化硝基四氮唑蓝（NBT）还原为紫色呈色物，呈色物的吸光度在530 nm时与乳酸含量呈线性关系。

产品使用方法

自备物品

- 仪器：酶标仪（520-540 nm，最适检测波长530 nm）、涡旋混匀仪、37℃恒温箱、微量移液器（1000 μL、200 μL、100 μL、10 μL）、离心机。

- 耗材：枪头（1000 μL、200 μL、10 μL）、EP管（0.5 mL、2 mL、10 mL）。

- 试剂：去离子水、生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）。

试剂准备

1. 检测前，将缓冲液、显色剂、终止液和标准品平衡至室温，酶贮备液置于冰上备用。

2. 酶工作液配制：按缓冲液与酶贮备液10:1的体积比混匀，现用现配，仅限当日使用。

3. 标准品稀释：按照说明书提供的稀释表配制不同浓度的标准品。

样本准备

1. 液体样本（如血清、血浆、细胞上清）：可直接测定。

2. 组织样本：匀浆处理后离心取上清。

3. 细胞样本：匀浆处理后离心取上清。

4. 样本稀释：根据预实验结果选择合适的稀释倍数，确保样本浓度在检测范围内。

操作步骤

1. 加样：取5 μL标准品或待测样本加入对应孔中。

2. 加酶工作液：每孔加入100 μL酶工作液。

3. 加显色剂：每孔加入20 μL显色剂。

4. 孵育：37℃孵育10分钟。

5. 终止反应：每孔加入180 μL终止液。

6. 检测：酶标仪530 nm处测定各孔OD值。

结果计算

1. 标准曲线：根据标准品OD值绘制标准曲线，拟合方程为y = ax + b。

2. 液体样本乳酸含量：

  LA含量 (mmol/L)=(ΔA530−b)÷a×f

3. 组织或细胞样本乳酸含量：

LA含量 (mmol/gprot)=(ΔA530−b)÷a÷Cpr×f

注意：

ΔA 530：样本OD值减去空白OD值。

f：样本稀释倍数。

Cpr：样本蛋白浓度（gprot/L）。

注意事项

1. 试剂保存：严格按照说明书要求保存试剂，不同批次的试剂不可混用。

2. 样本处理：组织或细胞样本需测定蛋白浓度，推荐使用BCA法。

3. 操作规范：

   - 试剂取用时应避免污染。

   - 加样时需触底加入，避免产生气泡。

4. 孵育时间：确保孵育时间充足，避免显色不完全。

5. 样本稀释：若样本浓度过高或过低，需调整稀释倍数重新检测。

6. 安全防护：实验过程中请穿戴实验服和手套，做好个人防护。

7. 适用范围：本试剂盒仅供科研使用，不适用于临床诊断。

技术参数

- 检测范围：0.12-7.0 mmol/L  

- 灵敏度：0.10 mmol/L  

- 批内差：≤1.4%  

- 批间差：≤3.5%  

- 回收率：105%