细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒，LK-1297

一、产品简介

细胞衰 老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化的一种潜在原因。本试剂盒可以用于培养 细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。β-半乳糖苷酶染色试剂盒以 X-Gal 为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物， 光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。本试剂盒仅染色衰老细胞，对正 常培养的衰老前的细胞、静止期细胞、永生细胞或肿瘤细胞等不会染色。

染色工作液配制(100次组分）  

试剂A: β-Gal固定液 100mL  2-8℃，避光，腐蚀性  

试剂B: X-Gal溶液  5mL    -20℃，避光         

试剂C: β-Gal染色液A 1mL    2-8℃，避光       

试剂D: β-Gal染色液B 1mL    2-8℃ ，避光  

试剂E: β-Gal染色液C 100mL  2-8℃

比例：B:C:D:E = 5:1:1:93（体积比），稳定性：现用现配，避免长时间存放。

容器要求：必须使用聚丙烯（PP）或玻璃容器，禁止使用聚苯乙烯（PS）。  

二、操作步骤

(一) 贴壁细胞染色（以6孔板为例）

1. 固定：吸弃培养液，PBS轻柔洗涤1次。  加入1 mL β-Gal固定液，室温固定15分钟。  

注意：其他培养板按面积比例调整用量。

2. 洗涤：吸弃固定液，PBS洗涤3次，每次3分钟。 优选步骤：用试剂E（β-Gal染色液C）替代PBS洗涤。

3. 染色：每孔加1 mL新鲜配制的染色工作液。37℃避光孵育12-24小时（需密封防止蒸发）。  

4. 观察与保存：光学显微镜下观察。  

短期保存：换为2 mL PBS，2-8℃可存数天。长期保存：水性明胶封片后避光存放。

(二) 悬浮细胞染色

1. 固定：离心收集细胞至1.5 mL离心管，PBS洗涤1次。加入1 mL β-Gal固定液，室温摇动固定15分钟（防团聚）。  

2. 洗涤：离心弃固定液，PBS洗涤3次，每次3分钟。  

3. 染色：加入0.5-1 mL染色工作液，37℃避光孵育12-24小时。  

4. 观察与保存：取细胞涂片观察，或离心后换1 mL PBS短期保存（2-8℃）。 长期保存：封片后2-8℃避光存放。

(三) 组织切片染色

1. 固定：冷冻切片直接固定，滴加足量β-Gal固定液覆盖组织，室温≥15分钟。  

2. 洗涤：PBS浸泡洗涤3次，每次≥5分钟。  

3. 染色：滴加染色工作液覆盖组织，37℃湿盒孵育12-24小时（防挥发）。  

4. 观察与保存：光学显微镜观察，或水性明胶封片长期保存。

三、关键注意事项

1. 安全防护:穿戴实验服及手套，β-Gal固定液具腐蚀性。  

2. 染色环境:禁止在CO₂培养箱中染色（pH干扰导致假阳性）。  

3. 样本处理:组织样本建议速冻切片，避免石蜡固定（酶易失活）。  

4. 容器选择:配制工作液禁用PS材质，染色容器无限制（如6孔板可用）。  

5. 长期保存技巧:爬片/涂片,蒸馏水洗2次→晾干→中性树胶封片。  

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。