Fix & Perm Kit 固定破膜剂,LK-7601

产品描述  

本产品为即用型流式细胞术固定破膜试剂套装，包含固定剂（含多聚甲醛）和破膜剂（含皂苷或Triton X-100）。适用于细胞表面及胞内抗原（如细胞因子、转录因子、磷酸化蛋白等）的同步固定与破膜处理，兼容后续抗体标记步骤。

规格：50次/100次   储存条件：2-8℃避光保存，有效期12个月。

产品组分  

Fixation Buffer（A液）：5ml/10ml     Permeabilization Buffer（B液）：5ml/10ml 

实验步骤(仅供参考）  

样本制备  

收集细胞（悬浮细胞直接离心，贴壁细胞需胰酶消化后终止），用预冷PBS洗涤2次，调整细胞浓度至1×10⁶mL。  

固定处理  

1. 在 5 ml 的流式管中加入 100ul含 1×10⁶ 个细胞的悬液以及荧光标记的表面抗体和/或相应的同型对照， 按照抗体说明书进行孵育。

2. 加入100ul A液，室温孵育 15 分钟。

破膜处理

1. 加入3 ml 流式染色缓冲液(目录号 F0001)或含 5% FBS 的 PBS,300-350g 离心5分钟， 弃上清，涡旋振荡，使残留的液体重悬细胞沉淀。

2. 加入 100ul B液和推荐体积的胞内抗体和/或相应的同型对照。

3. 涡旋振荡 1 -2秒，按照抗体说明书进行孵育。

上机检测

1. 加入 3 ml 流式染色缓冲液或含5% FBS的PBS ，300-350-g 离心-5-分钟，弃上清。

2. 加入 0.5 ml 流式染色缓冲液或含5% FBS的PBS，上机检测。如当天不能检测，则加入 0.5 ml 0. 1%福尔马林，2-8 ℃避光保存，在24小时内检测。

注意事项    

1. 样本保存：固定后的细胞可于4℃保存24小时，破膜后建议立即检测。  

2. 优化建议：首次使用需滴定抗体浓度，并设置未固定/未破膜的对照。  

3. 兼容性：适用于大多数流式抗体，但某些磷酸化蛋白检测需特殊破膜条件。  

常见问题  

Q1：破膜后细胞聚集：增加DNA酶（如DNase I）处理或减少固定时间。  

Q2：背景过高：延长封闭时间（建议使用1% BSA或血清封闭30分钟）。  

Q3：胞内信号弱：检查破膜剂浓度，或更换甲醇破膜（适用于部分抗原）。  

产品声明
1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.我公司所有产品仅限科学研究实验使用，严禁其他用途，因用于其他用途引起的人身财产安全事故，本公司概不负责。

3.由于科研实验本身存在不确定性和失败风险，对于珍贵样本务必谨慎使用，或者使用前请用普通样本做预实验，确保实验条件和方案成熟，以免对珍贵样本造成不可挽回的浪费和其他实验损失。产品如遇质量问题，售后仅限产品本身，不涉及连带其他任何赔偿。

4.介于科研实验的样本类型复杂性，实验因素多样性，本产品提供的产品说明书仅供参考，如所需实验与本说明书提供的实验信息不一致，请自行查阅文献。