免疫组化试剂盒（兔），LK-7379

产品简介

基于抗原-抗体特异性结合，通过酶（HRP）催化显色底物（DAB/AEC）反应，定位组织中的靶抗原：

1. 一抗：与目标抗原结合。

2. 二抗聚合物（HRP标记）：识别一抗，形成复合物。

3. 显色：HRP催化H₂O₂与DAB（棕黄色）或AEC（红色）反应，显色定位抗原。

产品组分

1.内源性过氧化物酶阻断剂:消除组织内源酶活性，降低背景染色

2.反应增强液:提高抗体结合效率（可能含封闭蛋白）

3.增强HRP酶标记的二抗聚合物:放大信号，催化显色反应

产品规格

3ml;6ml;18ml

样本要求

- 组织处理：10%中性福尔马林固定6-24小时，石蜡包埋。

- 切片：厚度3-5μm，防脱载玻片，65℃烤片1小时。

- 保存：未染色切片室温避光保存（建议7日内使用）。

操作流程（手工法）

1. 脱蜡与水化：梯度乙醇至水化，TBS缓冲液冲洗。

2. 抗原修复：依一抗说明书选择方法（如热修复）。

3. 阻断内源酶：过氧化物酶阻断剂孵育10分钟。

4. 一抗孵育：37℃ 1小时（设阴性/阳性对照）。

5. 增强液：室温10分钟，提升信号灵敏度。

6. 二抗聚合物：室温30分钟（HRP标记）。

7. 显色：DAB/AEC孵育5分钟（控制时间防过染）。

8. 复染：苏木素（10-60秒）→ 分化返蓝。

9. 封片：DAB用中性树胶（有机溶剂脱水），AEC用水性封片剂。

结果判读

- 阳性（+）：特定细胞部位出现棕黄色（DAB）或红色（AEC）着色。

- 阴性（-）：无显色（需对照成立）。

- 无效实验：若对照结果异常，需重复实验。

保存条件

2-8℃避光保存，有效期18个月。使用后立即放回冰箱，避免反复冻融。

常见问题与解决建议

背景染色高:内源酶未完全阻断,延长阻断时间或更换新鲜阻断剂

无信号:抗原修复不足/一抗失效,优化修复条件，验证一抗活性

非特异性着色:二抗交叉反应,增加封闭步骤，调整二抗浓度

DAB显色过深/扩散:显色时间过长,严格计时，显微镜下监控显色进程

如需进一步优化实验，建议：预实验确定一抗最佳稀释比。对难修复抗原尝试EDTA或柠檬酸钠缓冲液热修复。使用免疫组化专用多聚赖氨酸防脱片。

注意事项

1. 质量控制：必须设立阳性组织对照、阴性组织对照及试剂空白对照。避免固定不足/过度、脱蜡不彻底导致的假阴性/阳性。

2. 局限性：抗原表达异质性可能导致非预期结果。非特异性结合（如红细胞色素）可能干扰判读。

3. 安全：含生物成分，需穿戴防护装备。建议在通风橱操作。