Percoll细胞分离液,LK-1260

产品简介

Percoll PLUS由硅烷共价包覆的胶体二氧化硅组成。Percoll也由胶体二氧化硅组成，但涂有聚乙烯吡咯烷酮（PVP）。由于介质中颗粒大小的不均匀性，Percoll PLUS/Percoll离心导致自发形成密度梯度。Percoll PLUS/Percoll可通过梯度混合器或高速离心形成梯度。在后一种情况下，样品可与介质预混合，然后在原位产生的梯度上分离。这样，可以在一次操作中实现梯度形成和样品分离。Percoll PLUS/Percoll是细胞、病毒和亚细胞颗粒密度梯度离心的参考介质。

规格：100mL/1L

保存：未开封时可于室温保存，有效期4年。开封后保存于2-8℃。

物理性质

1. 渗透压低，可精确调节生理条件，而不受培养基的显著干扰。

2. 与活细胞和病毒的兼容性，可分离和恢复完整、完全活跃的系统。

3. 不渗透生物膜，离心过程中颗粒的浮力密度没有变化。

4. 离心过程中自发形成梯度，允许在离心管中混合大量样品。

5. 粘度导致梯度快速形成和颗粒分离。

产品使用方法（仅供参考）

l 梯度的制备

1. Percoll PLUS/Percoll最好用平衡盐溶液、生理盐水或0.25 M蔗糖进行配制。细胞可以在平衡盐溶液中按梯度分离。然而，亚细胞颗粒往往在盐存在的情况下聚集，建议用0.25M的蔗糖稀释的Percoll PLUS/Percoll中进行分离。

2. 将9份（v/v）Percoll PLUS/Percoll添加到1份（v/v）1.5 M NaCl、10×浓缩细胞培养基或2.5M蔗糖中，得到渗透压约340 mOsm/kg H₂O的溶液。通过调节Percoll PLUS/Percoll和盐或蔗糖溶液的相对体积，可以制备不同渗透压的溶液。

3. 可通过添加盐或蒸馏水对所需渗透压进行调整。当需要精确的渗透压时，建议使用渗透压计测量溶液的渗透压。也可以使用10×生理盐水以外浓度的溶液进行配制。l

l Percoll PLUS/Percoll离心

Percoll PLUS/Percoll在0.15 M盐溶液最低使用大约10000×g，或在0.25M蔗糖中最低使用大约25000×g，以便在角度转头中自动生成梯度。细胞或亚细胞颗粒可在离心前与Percoll PLUS/Percoll混合，并在原位形成等梯度区带。虽然Percoll PLUS/Percoll最好用角转子进行离心，但在水平转子中，在400g下进行20至30分钟的离心，细胞可在连续或不连续密度梯度上形成等梯度区带。l

l Percoll PLUS/Percoll 梯度的密度测定

1. 梯度分馏后的Percoll PLUS/Percoll溶液的密度可使用折射计进行测定。折射率与Percoll PLUS/Percoll溶液的密度呈线性关系。

2. Percoll在蔗糖和NaCl溶液中（20°C）经系列稀释的密度和折射率信息见表和图2

图2. 20℃下，Percoll在NaCl和蔗糖溶液中的折射率与密度之间的相关性。线性关系由最小二乘线性回归方法获得。Percoll在NaCl和蔗糖溶液中的线性拟合优度（R²）均为0.9995。

图 2 是通过测量Percoll在NaCl和蔗糖溶液中的密度和折射率获得的。溶液制备方法如下：在量筒中，加入最终所需体积1/10的1.5 M NaCl或2.5 M蔗糖。所需未稀释Percoll的体积可根据公式[1]进行计算：

V0=未稀释Percoll的体积[ml]

V=最终溶液的体积[ml]

ρ=最终溶液所需的密度[g/ml]

ρ₀=Percoll的密度（未稀释）[g/ml]

ρ₁₀=1.5 M NaCl或2.5蔗糖的密度[g/ml]

ρ10=1.5 M NaCl的密度= 1.058 g/ml(对于其他盐类有较小的差别)

2.5 M蔗糖的密度= 1.316 g/ml(对其他添加物有较小的差别

注意：公式[1]未考虑Percoll PLUS/Percoll中固体二氧化硅所占的体积。因此，溶液中NaCl和蔗糖的最终浓度将分别略高于0.15 M和0.25 M。使用密度计（Mettler-Toledo，DE-40）测量密度，使用阿贝折射计（Carl Zeiss）测量折射率。

l 离心后去除 Percoll PLUS/Percoll

1. 通过用生理盐水稀释并离心收集细胞，可以得到不含Percoll PLUS/Percoll颗粒的细胞。

2. 亚细胞颗粒可通过上述步骤从Percoll PLUS/Percoll中分离出来。颗粒大小决定从PercollPLUS/Percoll分离颗粒所需的离心力。

3. 凝胶过滤或离子交换色谱法也可用于从Percoll PLUS/Percoll中分离生物材料。

l 实用注意

1. 设备的护理和清洗：聚碳酸酯管可以和Percoll一起使用，因为颗粒不会粘附在这些管的壁上。Percoll溶液通常在离心后会在管的底部产生一些颗粒状的紧密的硅小球，并沉淀在用于分离等操作的管路的壁上。这些沉淀变干后很难清除。因此建议所有的设备在使用后马上清洗。溢出的Percoll可以用水清洗去除。

2. 硅颗粒聚集：不管是在高压灭菌期间还是在长期的保存期间，所有硅溶胶的固有倾向是形成聚集物。这些聚集物可以在一些批次的Percoll中可以被观察到，它们或者是做为一种轻微的沉淀物，或者是密度为1.04到1.05g/ml的模糊的白色区带。这个区带可能在离心中或预制梯度的低速离心期间形成梯度时形成。聚集的硅颗粒并没有干扰生物颗粒的分离，因为几乎所有的细胞和细胞器在Percoll中的浮力密度都大于1.05 g/ml。

3. 对于某些特定试验，可能需要去除这些聚集物；这可以通过在离心之前通过深层过滤器过滤Percoll来实现。由于硅烷涂层，Percoll PLUS中不会出现聚集问题。