染色质免疫沉淀（ChIP）试剂盒，LK-6916

产品概述  

本染色质免疫沉淀（ChIP）试剂盒提供完整的实验流程和试剂，用于研究转录因子与DNA结合位点的相互作用。适用于高通量测序（ChIP-Seq）或定量PCR（ChIP-qPCR）分析。  

产品规格  

- 试剂盒包含40次ChIP实验所需试剂。  

- 储存条件：部分试剂需-20℃保存，部分试剂需4℃保存。  

1. 简介  

染色质免疫沉淀（ChIP）是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。通过交联、裂解、免疫沉淀和DNA纯化等步骤，可鉴定特定转录因子或组蛋白修饰在基因组中的结合位点。  

2. 技术路线  

1. 交联：用甲醛固定细胞，使蛋白质与DNA交联。  

2. 细胞核制备：裂解细胞，提取细胞核。  

3. 超声裂解：将染色质片段化为200-1000 bp的片段。  

4. 免疫沉淀：使用特异性抗体富集目标蛋白-DNA复合物。  

5. 洗涤与洗脱：去除非特异性结合，洗脱目标DNA。  

6. 解交联与纯化：逆转交联，纯化DNA用于后续分析。  

3. 试剂列表  

注意：

- 4℃保存的试剂若出现粘稠或絮状物，使用前需恢复至室温或37℃预热至澄清。  

- 保质期为12个月，详见外包装标签。  

4. 操作步骤  

4.1 交联  

1. 用1%甲醛固定细胞，室温交联10分钟。  

2. 加入甘氨酸终止交联，冰上孵育5分钟。  

3. 离心收集细胞，用PBS洗涤两次。  

4.2 细胞核制备  

1. 用裂解缓冲液1和2裂解细胞，离心收集细胞核。  

2. 用裂解缓冲液3重悬沉淀，冰上裂解10分钟。  

4.3 超声裂解  

1. 超声破碎染色质至200-750 bp（ChIP-Seq）或300-1000 bp（ChIP-qPCR）。  

2. 离心取上清，电泳检测片段大小。  

4.4 免疫沉淀  

1. 将样品分为IP组、IgG组和Input组。  

2. IP组加入特异性抗体，IgG组加入对照抗体，4℃孵育过夜。  

3. 加入Protein A/G磁珠，室温结合30分钟。  

4.5 洗涤与洗脱  

1. 用洗涤缓冲液和TE洗涤缓冲液洗涤磁珠。  

2. 用洗脱缓冲液65℃洗脱DNA。  

4.6 解交联与纯化  

1. 65℃解交联6小时或过夜。  

2. 用RNase A和Proteinase K处理样品。  

3. 乙醇沉淀DNA，溶解于无菌水中。  

5. 对照设置