BCA蛋白浓度测定试剂盒,LK-7210

产品介绍

蛋白质在碱性条件下将二价铜离子还原为一价铜离子，一价铜离子与BCA分子形成紫色络合物。此络合物可用540-590 nm波长检测，反应物的颜色和蛋白浓度在一定范围内具有线性关系。酶标仪（540-590 nm，最佳波长562 nm），检测比色法。本试剂盒适用于检测血清、血浆、培养液、动植物组织及培养细胞样本中的蛋白含量。检测范围：0.02-1mg/mL(0.02-1ug/ul)  

使用方法（仅供参考）

试剂准备

1. 蛋白标准品1 mg/mL的配制: 取1 mL试剂D（标准品稀释液）加入1支试剂C（蛋白标准品）中，溶解混匀即可。置于冰上待用，可分装-20℃保存3个月。  

2. BCA工作液的配制:  按试剂A（BCA溶液）:试剂B（铜盐溶液）为50:1的体积比混匀。

50次（孔）用量：取200ul试剂B（蓝色溶液）加入10ml试剂A中，现用现配，于2-8℃保存24 h。  

标准品稀释

按以下表格稀释标准品：  

检测步骤

1. 标准孔：取20 ul不同浓度的标准品，加入到对应的标准孔中。  

  样本孔：加入20ul样本(组织样本一般按照1/40稀释，细胞样本一般按照1/10稀释）。
注意：稀释比例建议梯度稀释，已防止超出检测范围。 

2. 加入BCA工作液: 向各孔垂直悬空加入200ul的BCA工作液。  

3. 混匀: 在酶标仪上振荡混匀20 s。  

4. 反应: 覆膜，37℃反应30 min。  

5. 测定: 用酶标仪在562 nm波长下测定OD值。  

结果计算

1. 绘制标准曲线： y = ax + b

y: 标准品OD值 - 空白OD值  ；        x: 标准品浓度（mg/mL）  

2. 计算样本蛋白含量：蛋白含量(mg/mL)=(ΔA₅₆₂−b)÷a×f

ΔA₅₆₂: 样本测定OD值 - 空白OD值。    f: 样本加入检测体系之前的稀释倍数

注意事项

1. 样本要求: 样本不能含EGTA、EDTA等螯合剂，也不能含有DTT、巯基乙醇等还原性物质。  

2. 试剂保存: 试剂严格按说明书中的保存条件保存，不同批次试剂盒中的试剂不能混用。  

3. 检测选择: 样本背景较高时，推荐考马斯亮蓝法。样本蛋白浓度较高时，推荐双缩脲法。  

4. 操作细节:  试剂加入酶标孔时，应触板底缓慢加入，避免产生气泡（气泡影响测定结果）。  

产品声明

本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。