8um细胞培养小室,PET(适配24孔板），PE658048

产品介绍  

本产品为悬挂式设计，专为24孔板量身打造，是进行细胞共培养、趋化性研究、细胞迁移及侵袭实验等理想的通透性支持装置。其底部镶嵌了极薄的聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）蚀刻膜，为细胞生长提供了一个更接近体内的微环境，允许细胞从基底面和顶面分泌及吸收分子，有效模拟体内环境以进行细胞功能研究。

产品特点  

- 优质PET膜材：采用经组织培养处理（TC处理）的PET膜，亲水性好，利于细胞贴附与生长。

- 极佳光学清晰度：PET膜具有优异的透光性，透明性好，在倒置显微镜下可清晰观察细胞形态、融合度及膜两侧的细胞状态，便于实时监控。

- 8 µm孔径设计：孔径适合大多数肿瘤细胞（如乳腺癌细胞MCF-7、黑色素瘤细胞B16-F10等）及淋巴细胞的迁移和侵袭研究。

- 人性化悬挂设计：小室边缘设计有专用支架，可稳固悬挂于24孔板内，底部悬空，确保上下室培养液的有效流通。边缘的开口设计便于移液器吸头操作，加样方便。

- 无菌独立包装：产品经伽马射线辐照灭菌，无DNase/RNase，无热原，无细胞毒性，独立包装确保使用前不受污染。

使用方法（仅供参考）  

实验前准备：

1.  平衡至室温：从包装中取出独立无菌小室前，将其置于室温下约10-15分钟。

2.  水化膜：在无菌操作台中，将小室放入24孔板。如需提高细胞贴壁性，可在上室加入适量无血清培养基，下室加入相应培养基，置于培养箱中水化至少1小时。

以细胞迁移实验为例：

1.  制备细胞悬液：消化收集细胞，用无血清或低血清培养基重悬。计数并调整细胞密度至适宜浓度（如1-5 x 10⁵ cells/mL，具体取决于细胞类型）。

2.  下室加趋化因子：取出水化好的小室，吸走上室液体。在新的24孔板下室中加入含趋化因子或高浓度血清的培养基（建议600-650 µL）。

3.  上室接种细胞：用镊子小心将小室放入加好下室液的孔中。在上室中央缓慢滴加制备好的细胞悬液（建议100-200 µL）。注意避免气泡产生，气泡会阻碍细胞迁移。

4.  培养：盖上板盖，将培养板平稳放入37℃、5% CO₂的培养箱中培养。培养时间根据细胞迁移能力而定（通常为12-48小时）。

5.  染色与计数：

    - 培养结束后，取出小室，用棉签轻轻擦拭上室内的未迁移细胞。

    - 将小室置于PBS中清洗。

    - 在下室加入固定液（如4%多聚甲醛）或直接浸泡小室进行固定。

    - 使用结晶紫染液对迁移至膜下表面的细胞进行染色。也可用DAPI染色便于荧光计数。

    - 用清水冲洗多余染液，自然晾干。

    - 在显微镜下随机选取5-10个视野，计数膜下表面的细胞数量，进行统计分析。

注意事项  

1.  无菌操作：虽然产品经过灭菌，但整个操作过程需严格遵守无菌操作规范，使用灭菌后的镊子等工具。

2.  避免膜损伤：PET膜虽然透明度高，但也比较薄。在擦拭上室细胞时，动作需轻柔，避免戳破或划伤膜。

3.  防止气泡：将小室放入下室或加样时，务必检查膜下是否有气泡。气泡会阻断有效接触面积，严重影响实验结果。如有气泡，可轻轻提起小室，倾斜放入以消除气泡。

4.  溶剂兼容性：本产品可耐受大多数水溶性溶液、固定液（如甲醛）及染色液。不推荐使用强酸、强碱或有机溶剂如丙酮、氯仿等，以免损坏膜结构或支架。

5.  优化接种密度：不同细胞系的大小和迁移能力不同。建议首次实验时设置2-3个细胞接种密度梯度，以确定最优的实验条件。  

常见问题解答  

Q1：PET膜和PC膜有什么区别？我该如何选择？

- 光学特性：PET膜是透明的，透光性极佳，非常适合在显微镜下动态观察细胞状态。PC膜是半透明的，虽然不易撕破，但镜下观察细胞形态比较困难。

- 吸附性：PC膜对蛋白质的吸附率相对较低，如果实验涉及低浓度蛋白药物或细胞因子的检测，PC膜可能更优。本产品PET膜适用于大多数需要清晰观察的迁移和侵袭实验。

Q2：细胞穿过8 µm孔径后，常常掉落到下室，导致计数不准，怎么办？

这确实是8 µm孔径常见的问题。解决方法有：

1.  缩短培养时间。

2.  增加上室细胞密度，使细胞更早铺满形成单层，但需注意细胞活性。

3.  在染色前，可以尝试用4%多聚甲醛固定小室，这有助于将已穿过但尚未掉落的细胞“固定”在膜上。

4.  或者，收集下室培养基，离心计数掉落的细胞，与膜上细胞数合并统计。

Q3：细胞贴壁不好，或者不往膜上迁移怎么办？

- 包被基质：可以尝试在膜上包被基质胶（用于侵袭实验）或明胶、纤连蛋白、胶原蛋白I等，以促进细胞贴附和诱导迁移。

- 血清浓度：检查下室趋化因子浓度，可适当增加血清浓度或趋化因子用量。

- 水化：接种前请务必用培养基充分水化膜，这有助于去除膜上的疏水基团，利于细胞贴壁。

Q4：加样后出现侧漏，上室液面很快下降？

- 检查小室放置是否垂直，底部是否完全悬空，没有贴壁。

- 确保加入上室的液体量没有超过最大建议量（通常350 µL）。

- 确认膜的完整性，没有在操作过程中被戳破。

Q5：如何长期保存产品？

请于室温下，在阴凉干燥处保存。避免高温、高湿及强烈的阳光直射。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。