基质胶，无酚红(Matrix, LDEV-Free 类器官专用），H10020

产品介绍  

本产品是一种无酚红、LDEV（乳酸脱氢酶 elevating virus）低毒的基底膜提取物基质胶，专为类器官（Organoid）的三维培养而优化设计。它模拟了体内细胞外基质的复杂成分和结构，主要包含层粘连蛋白、IV型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白等多种生物活性分子，能为多种来源的干细胞（如成体干细胞、多能干细胞）或肿瘤细胞提供一个理想的生长、分化和自组织微环境，从而成功构建和长期扩增类器官。  

产品特点  

1.  高生物活性： 经过严格的质量控制，确保每批次产品具有高稳定性和可重复性，为类器官的高效形成和生长提供最优支持。

2.  无酚红配方： 避免了酚红可能带来的雌激素样效应，特别适用于对激素敏感的细胞研究，如乳腺、前列腺等组织来源的类器官培养，使实验结果更准确。

3.  LDEV-Free 低毒： 通过PCR检测确保产品不含乳酸脱氢酶提升病毒（LDEV），降低了实验过程中的潜在风险，提高了生物安全性。

4.  超低生长因子： 经过特殊处理，去除了大部分内源性生长因子，为研究者提供了一个背景清晰的平台，便于精确调控外源性生长因子，实现定向分化。

5.  高浓度与均一性： 可以提供高浓度的基质胶，确保在成胶后形成坚固且均一的三维网络结构，有效支持类器官的复杂结构发育。

使用方法（仅供参考）  

重要提示： 所有操作必须在无菌环境下进行，并始终使用预冷的耗材（枪头、离心管、培养板等），因为基质胶在4°C以上会开始凝固。

A. 实验前准备

1.  器材预冷： 将实验所需的枪头、离心管、培养板等置于冰上预冷至少30分钟。

2.  基质胶解冻：

       推荐方法： 将整管基质胶置于4°C冰箱过夜（约8-16小时）缓慢溶解。这是最温和的方式，能最大程度保护其生物活性。

       快速方法： 将基质胶置于冰上或冷水（约10°C）中，期间轻柔摇晃以加速溶解。严禁在室温、37°C水浴或微波炉中解冻！

3.  细胞准备： 准备好单细胞悬液或细胞团（如消化后的组织碎片）。

B. 铺胶步骤（以24孔板为例）

1.  将完全溶解、均匀的基质胶转移到预冷的离心管中，置于冰上。

2.  根据实验需求，将细胞重悬于预冷的基质胶中。建议细胞密度根据具体类器官模型进行优化。

       注意： 重悬操作需迅速，避免基质胶在枪头中提前凝固。

3.  用预冷的枪头，将细胞-基质胶混合液快速、均匀地滴加至预冷的孔板中央。每孔推荐体积为20-50 µL（形成圆顶状胶滴）。

4.  将培养板小心转移至37°C、5% CO₂培养箱中，正置孵育15-30分钟，使基质胶完全聚合凝固。

5.  待基质胶完全凝固后（呈不透明固体状），沿孔壁缓慢加入预热的、含有所需生长因子的类器官完全培养基，避免冲散胶滴。

6.  将培养板放回培养箱，开始常规培养。根据类器官类型定期更换培养基。

C. 类器官传代与收集

1.  吸弃旧培养基。

2.  加入预冷的类器官回收试剂（如细胞复苏液）或PBS，于冰上或4°C放置10-30分钟，轻轻吹打以溶解基质胶。

3.  收集细胞悬液，通过离心和洗涤去除基质胶残留。

4.  根据实验需求，将类器官进行机械或酶学消化，然后重复上述铺胶步骤进行传代，或收集用于下游分析。

注意事项  

1.  温度控制是关键： 在操作过程中，必须始终保持基质胶和含有基质胶的耗材处于冰上或4°C环境。任何温度波动都会导致其提前凝固。

2.  避免反复冻融： 建议将产品分装成小份储存，以避免反复冻融导致活性下降。解冻后的产品建议尽快使用。

3.  轻柔操作： 在吹打和混匀细胞-基质胶混合液时，动作需轻柔，避免产生气泡，以免影响胶的均一性和类器官生长。

4.  个人防护： 本品为动物来源产品，虽经检测不含特定病毒，但仍需作为潜在生物危害物质处理。操作时请佩戴手套、实验服等个人防护装备。

5.  批次差异： 尽管经过严格质控，但不同批次的基质胶在生物学活性上仍可能存在细微差异。对于长期研究，建议预留足够量的同一批次产品。  

常见问题解答  

Q1: 为什么我的基质胶无法凝固？

   A1: 最常见的原因是操作温度过高。请确保所有耗材预冷充分，且操作全程在冰上进行。其次，检查解冻是否完全且混合均匀。培养基的pH值也会影响凝固，请确保培养基的pH在7.2-7.4之间。

Q2: 类器官形成效率低或长不大是什么原因？

   A2: 可能原因包括：

       细胞活性差： 确保起始细胞活性高。

       基质胶浓度/用量不当： 优化铺胶的厚度和浓度。

       生长因子配方不佳： 检查并优化培养基中的生长因子和添加物组合。

       消化过度： 传代时消化时间过长可能导致干细胞损伤。

       基质胶批次问题： 尝试使用新的批次。

Q3: 如何选择有酚红还是无酚红的基质胶？

   A3: 对于大多数类器官培养，无酚红是更优选择，因为它消除了酚红的潜在干扰，特别适用于内分泌相关研究（如乳腺、前列腺、卵巢等）。有酚红产品通常用于对酚红不敏感的细胞或成本优先的常规筛选实验。

Q4: 溶解后的基质胶可以重新冻存吗？

   A4: 强烈不建议。 反复冻融会显著降低基质胶的生物活性和凝固能力，导致实验失败。请务必根据单次使用量进行分装。

Q5: 基质胶的浓度如何调整？

   A5: 可以使用预冷的、无血清的培养基或PBS进行稀释。稀释操作必须在冰上进行，并迅速混匀。请注意，稀释可能会影响最终胶的强度和类器官的生长情况，需要进行条件优化。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。