线粒体羟基自由基检测试剂盒

（LK-3285）

产品货号：LK-3285

规格：200T/¥4950

保存温度：-20℃

产品简介

细胞内羟自由基（•OH）的检测对于理解细胞氧化还原调控机制及其失调在多种病理过程中的作用至关重要。羟自由基作为活性氧（ROS）家族中反应活性最强的成员，会通过与其他分子相互作用以达到稳定状态。该自由基通常被认为是氧化代谢产生的有害副产物，可对生命系统造成分子损伤——其平均寿命仅10⁻9纳秒，却几乎能与所有生物分子（包括核DNA、线粒体DNA、蛋白质及膜脂质）发生反应。

适用范围

用于标记活细胞

试剂配制与保存说明

除非另有说明，所有未使用的储备液均应分装成单次使用的小份，配制完成后保存于-20°C，并避免反复冻融。

1. MitoROS™ OH580储备液（500X）配制方法

向MitoROS™ OH580（组分A）的小瓶中加入50 µL二甲基亚砜（DMSO，组分C），充分混匀。

注意：1.  25 µL储备液可满足1块检测板的用量需求 

           2. 未使用的溶液可分装密封，避光保存于≤-20°C环境，可稳定保存1个月以上，避免反复冻融

 2.工作液配制方法

取25 μL 500X MitoROS™ OH580 DMSO储备液加入10 mL检测缓冲液（组分B）中，充分混匀。

注意：配制好的工作液在室温下至少可稳定保存2小时

操作步骤

1.移除细胞培养基，按96孔板每孔100 μL或 384孔板每孔25 μL的比例加入MitoROS™ OH580工作液，将细胞置于37°C条件下避光孵育60分钟。

2.为诱导羟基自由基生成，需将测试化合物溶解于适当缓冲液（如PBS或HHBS）中，37℃避光处理细胞特定时间。

注：1.采用Fenton反应体系（10 μM CuCl2+100 μM H2O2）处理HeLa细胞1小时诱导外源性羟基自由基；

       2.使用含PMA（佛波酯）的培养基处理RAW264.7细胞4小时刺激内源性羟基自由基）

3.用HHBS或DPBS缓冲液洗涤细胞2-3次，每孔加入100 μL检测缓冲液（组分B）

4.使用配备TRITC滤光片的荧光显微镜直接观察；或者采用荧光酶标仪在激发/发射波长540/590 nm（截止波长570 nm）条件下进行底部读数，定量检测荧光信号变化。