脂质提取试剂盒（无氯仿）

(LK-4520)

本试剂盒提供了一种无氯仿的脂质分离方法，适用于血浆、血清、培养细胞及组织样本。回收的有机相可以干燥并重新悬浮，用于下游脂质分析。

脂质是指一组天然存在的分子，包括单甘油酯、甘油二酯、甘油三酯、磷脂、脂溶性维生素、脂肪和甾醇。脂质可以维护细胞膜的完整性，并在细胞活动中发挥重要作用，如膜运输、信号转导和能量储存。脂质代谢失调与许多疾病有关，如癌症、糖尿病和心脏病。传统的脂质提取是使用Folch法进行的，其中脂质被提取到有机相中，从这种有机相中分离脂质是繁琐的，可能会导致其他相的物质污染。这些污染物可能会对下游的脂质分析产生负面影响。此外，Folch法使用有毒的氯仿作为有机相溶剂。本试剂盒中的方法克服了低相提取的繁琐和使用氯仿的危险，同时实现了高效的脂质提取。

规格：

50T/¥7560

保存温度

常温，避光

有效期

一年

适用样本

血浆、血清、培养细胞及组织

提供试剂

1. 脂质提取液25 mL

2. 裂解液II 5ml

使用方法

1.使用前需以低速离心试剂瓶。

2.样本制备

2.1血浆样本

2.1.1 在含有抗凝剂（如枸橼酸盐、EDTA或肝素）的试管中采集血液，并通过倒置混合。

2.1.2 将血液置于4℃条件下以1000×g离心10分钟。

2.1.3 在不干扰白细胞层的情况下收集血浆上清液。

2.1.4 样品可立即提取，或分装后保存于-80°C。

2.2 血清样本

2.2.1 在不含抗凝剂的试管中采集血液。

2.2.2 让血液在室温下静置凝固30分钟。

2.2.3 以2500×g离心20分钟。

2.2.4 在不干扰白细胞层的情况下收集上清液。

2.2.5 样品可立即提取，或分装后保存于-80°C。

2.3 细胞样本：

2.3.1 通过1000×g离心5分钟获得1-5×10^5个细胞的沉淀。

2.3.2 用PBS洗涤细胞沉淀一次。

2.3.3 将沉淀物重悬于25-50 µL PBS中。

2.3.4 按下述方法进行检测。

2.4 组织样本

2.4.1 用手术刀/剃刀将组织小心地切碎成小块，并称重至50 mL锥形管中。

2.4.2 每个样本使用约10-50毫克组织（湿重）进行提取。

2.4.3 按下述方法进行检测。

3. 检测操作步骤：使用前需平衡所有材料及配制试剂的温度。

- 按照上述方法制备样本。

- 下列方法适用于25 μL 样本量。随着样本量的增加，每个试剂盒的制备次数将减少。

3.1 将25 μL 样品（或10-50 mg组织）加入清洁的1.5 mL微量离心管中。

3.2 向样品中加入500 μL 脂质提取液。

3.3 立即使用管式振荡器或涡旋仪进行1-2分钟的涡旋处理。

注：对于组织样本，需在冰上使用匀浆器对组织块进行匀浆处理。将匀浆液在4°C条件下以10,000 x g离心5分钟，并收集上清液。

3.4 在室温条件下，于轨道式振荡器上振荡混合物15-20分钟。

3.5 将试管离心，10,000 x g，5分钟，小心收集含有脂质的上清液，并转移至清洁试管中。

3.6 将含有上清液的试管打开并置于真空浓缩器或干燥的 37ºC 培养箱中过夜干燥。

注：完全干燥后可见一层薄膜。如果需要进行脂质组学、 HPLC 或MS分析，我们建议将脂质提取物重新悬浮于有机溶剂中，如丁醇或环己烷。如果下游应用是使用试剂盒分析脂质（例如，定量胆固醇、甘油三酯等），我们建议将脂质提取物重新悬浮于50 μL 裂解液II中。在37°C下对脂质提取物进行15-20分钟的超声处理。