6孔板0.4um细胞培养小室（PET），PE650424

产品介绍  

本产品为6孔板设计的细胞培养小室，用于共培养、趋化、药物转运及细胞侵袭等实验。其底部镶嵌着一层极薄的聚对苯二甲酸乙二酯（PET）膜，孔径为0.4 μm 。

该孔径允许培养基中的小分子物质、药物或细胞因子自由通过，但能有效阻止细胞的穿膜迁移，因此特别适合进行细胞共培养（非接触式）、上皮细胞/内皮细胞极化研究以及药物转运实验 。

本产品经过TC处理（Tissue Culture Treated），表面亲水性增强，有利于细胞的黏附和生长 。

产品特点  

1.  优质PET膜：PET膜具有极佳的光学清晰度，透明度高。在显微镜下无需染色或固定，即可直接观察细胞生长状态、融合度及细胞层形态 。

2.  极佳的细胞可见性：透明的PET膜设计，使得倒置显微镜可以清晰地对膜两侧的细胞进行观察和拍照 。

3.  便于加样操作：小室边缘采用创新设计，移液器吸头可以轻松探入小室与孔壁之间的空隙，方便从侧壁加液或吸液，避免碰触小室底部膜 。

4.  标准化处理：

    - 无菌：产品经γ射线辐照灭菌 。

    - 无酶/无热原：无DNase、无RNase，无内毒素，确保细胞生长环境安全 。

5.  悬挂式设计：小室悬挂于孔中，配合三臂支撑结构，确保膜下方与下层培养基充分接触并留有均匀的移液空间 。

使用方法（仅供参考）  

实验前准备： 请预先将完全培养基预热至37℃。

步骤一：平衡与水化（推荐）

1.  在6孔板的下室孔中加入适量完全培养基（通常为2.5-3.0 mL）。

2.  用无菌镊子夹取细胞小室，轻轻放入已加液的孔中。放入时可将小室倾斜，使膜先接触液面，避免膜下方产生气泡 。

3.  在上室内加入2 mL预热的不含血清或含所需浓度血清的培养基。

4.  将培养板放入37℃ CO₂培养箱中孵育至少1小时（也可过夜）。这一步有助于小室膜与培养基充分平衡，改善细胞的贴附和分布 。

步骤二：细胞接种

1.  平衡结束后，小心吸走上室和下室的平衡用培养基。

2.  根据实验需求，在下室孔中加入新鲜培养基（建议2.5-3.0 mL）。

3.  将小室放回孔中，确认膜下无气泡（如有气泡，提起小室去除气泡后重新放入 ）。

4.  在上室中加入制备好的细胞悬液（通常建议接种体积为2.0 mL）。细胞接种密度需根据细胞类型和实验目的进行优化 。

5.  盖上培养板盖，放入CO₂培养箱中常规培养。

步骤三：培养与换液

1.  换液操作：吸走上室旧液，从侧壁缓缓加入新鲜培养基；下室换液时需将小室移开，吸走旧液，加入新液后再将小室放回 。

2.  气泡检查：培养期间注意观察下室是否有气泡产生。气泡会阻断下层培养基对小室的趋化或营养作用，需及时去除 。

步骤四：细胞收集与分析

1.  细胞染色/固定：可以直接在小室中对细胞层进行固定和染色。PET膜耐受大部分固定液和染色溶剂 。

2.  膜片切割：若需长期保存膜片，可用解剖刀沿膜边缘小心将膜切下 。

3.  细胞消化：如需收集细胞进行传代或计数，可在上室中加入适量胰酶进行消化 。

注意事项  

1.  一次性使用：本产品为一次性无菌耗材，请勿重复使用。重复清洗灭菌会破坏膜结构、TC处理层，并可能残留污染物 。

2.  避免划伤膜：在向上室加液或吸液时，移液器吸头不要触及膜表面，以免戳破或划伤细胞层。

3.  防止气泡：务必确保小室膜下方无气泡残留，这是保证实验结果稳定性的关键 。

4.  接种密度优化：细胞在不同膜材质上的贴附对起始接种密度较敏感，初次实验建议设置不同的接种密度梯度，以确定最佳生长条件 。

5.  包被处理：对于贴壁困难的细胞，需在小室膜上进行基质胶（Matrigel）、多聚赖氨酸或胶原蛋白包被。包被液通常因表面张力不会很快漏下，但需检查膜是否完整 。

6.  储存条件：未拆封产品请避光、室温阴凉处储存 。

常见问题解答  

Q1：0.4 μm的孔径是否可以进行细胞迁移或侵袭实验？

A： 通常不可以。0.4 μm的孔径远小于细胞大小，细胞无法主动穿过该孔径。该规格主要用于细胞共培养（阻止细胞穿过）、营养转运或药物透过实验。细胞迁移/侵袭实验通常选用3.0 μm、5.0 μm或8.0 μm孔径 。

Q2：为什么膜看起来很薄，加入液体后会不会漏？

A： 不会漏。虽然PET膜极薄且布满微孔（约1x10⁸ pores/cm² ），但在表面张力的作用下，加入上室的液体并不会很快漏到下室，而是会稳定地覆盖在膜表面。如果短时间内液体大量滴漏，请检查膜是否有破损 。

Q3：小室在使用前需要水化吗？

A： 对于普通的TC处理PET膜，水化并非必需步骤，但推荐进行，尤其是对于比较挑剔的细胞。对于预包被了基质胶（如Matrigel）的侵袭小室，则必须按照说明书进行水化操作 。

Q4：细胞在小室膜上的贴壁效果会不会不如培养板？

A： 本产品经过了与培养板相同的TC表面处理，细胞的贴壁效果应与普通培养板类似。但在普通培养时需要包被才能贴壁的细胞（如神经元、某些原代细胞），在小室上同样需要包被 。

Q5：如何进行共培养？细胞分别种在哪里？

A： 共培养实验有两种模式：

1.  非接触式共培养：将一种细胞接种在上室内（膜内侧），另一种细胞接种在下室孔板底。通过0.4 μm膜进行细胞因子或代谢产物交换 。

2.  接触式共培养：将一种细胞接种在上室内膜底面（需翻转小室预先接种），稳定后将小室放回已种有另一种细胞的下室中。

Q6：小室出现大量气泡怎么办？

A： 气泡通常是在小室放入下室时速度过快或垂直放入导致的。发现气泡后，应用镊子轻轻提起小室，待气泡完全逸出后，将小室倾斜重新缓慢放入液面中 。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。