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WB转膜液干粉,LK-6978
产品介绍
本产品为预配制的转膜液干粉,溶于1L蒸馏水或去离子水后,即成为经典的Towbin转膜缓冲液(Tris-Glycine体系,含20%甲醇及适量SDS)。
适用于Western Blot实验中蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)转移至PVDF膜或硝酸纤维素膜(NC膜),尤其适合较大分子量蛋白(>100 kDa) 的转膜。
产品特点
- 快速配制:无需称量多个组分,避免称量误差
- 稳定性好:干粉形式,室温干燥保存,有效期长
- 兼容性强:适用于湿转
- 膜损伤低:缓冲能力稳定,转膜产热少
使用方法(仅供参考)
所需试剂(自备)
- 甲醇(分析纯或更高纯度)
- 蒸馏水或去离子水
配制1L工作液步骤
1. 取一包转膜液干粉,倒入洁净的烧杯或量筒中。
2. 加入约800 mL蒸馏水,搅拌或磁力搅拌至完全溶解。
3. 加入 200 mL 甲醇,混匀。
4. 用蒸馏水定容至1000 mL,再次混匀。
5. 使用前建议4℃预冷(尤其湿转时,可降低产热)。
> 注意:
> - 如进行半干转转膜,需要自行摸索实验条件,参考:甲醇可减至 10–15%(100–150 mL),其余用水补足。
> - 转膜液不宜回收使用,以免影响转膜效率和背景均匀性。
注意事项
1. 甲醇有毒,配制及使用时请在通风橱中进行,戴手套、护目镜。
2. 本产品不含甲醇,请务必自行添加,否则转膜效率极低。
3. 对于小分子蛋白(<20 kDa),可减少SDS或添加PVP、Tween-20等(配方不适用时建议选用专用转膜液)。
4. 转膜前需用甲醇激活PVDF膜(NC膜无需激活)。
5. 干粉应密封保存于干燥阴凉处,避免受潮结块。
6. 配制好的转膜液建议当天使用,4℃可保存1–2周,但效率会下降
常见问题解答
问:转膜后蛋白完全未转移,可能是什么原因?
答:常见原因包括忘记加甲醇,或电极方向错误。解决方法:按说明加入20%甲醇;检查正负极方向(蛋白应从负极转至正极)。
问:膜上出现不均匀背景,如何避免?
答:通常由转膜产热过多或气泡残留引起。建议4℃预冷转膜液,并在转膜前彻底赶尽凝胶与膜之间的气泡。
问:小分子蛋白容易转穿膜,怎么办?
答:可缩短转膜时间,或改用0.22 µm孔径的NC膜。
问:大分子蛋白转膜效率低,如何改进?
答:可适当提高SDS至0.05%;湿转时建议将甲醇浓度降至10–15%。
问:配制后溶液出现浑浊,正常吗?
答:通常是因为干粉未完全溶解或水质不佳。请充分搅拌至澄清,并使用去离子水配制。
产品声明
本产品仅限于科研,如需储存珍贵样本,请自行小规模尝试后大批量实验,产品售后仅限产品本身,无其他任何连带责任,请须知。
本产品仅供研究使用,不适用于临床诊断或治疗。