BCA蛋白定量试剂盒

（LK-5000）

产品货号：Lk-5000

规格：200T/500T

储存及运输温度：BCA蛋白定量试剂盒置于2~8℃保存，保质期12个月，2~8℃运输；Bsa标准品，置于-25~-15℃保存，保质期12个月，2~8℃运输。

产品简介

Bicinchoninic acid（bca）法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与cu2+络合并将cu2+还原成cu+。Bca与cu+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。与lowery法相比，bca蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的紫蓝色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。与考染法相比，bca法的显著优点是不受去垢剂的影响。

适用范围

用于BCA法的蛋白定量检测。

产品特点

1．检测范围：20~2000µg/ml；

2．变异系数小，定量效果佳；

3．受去污剂、还原剂等杂质影响小

操作步骤

1．所需设备：比色计、酶标仪或微板比色仪（工作波长最佳为562 nm，可在540~590 nm之间）。

2．显色工作溶液配制：

A.计算显色工作液总量：工作液总量=（bsa标准品样本个数＋待测样本个数）×复孔数×每个样本显色工作液体积

B.根据计算出的所需显色工作液用量，将试剂a和试剂b按照50:1的体积比，配制显色工作液，充分混匀。呈嫩绿色，室温24 h内稳定。

注意：由于加样可能存在误差，建议配制bca工作液时，多配制1~2个孔的量；bca试剂a在储存时可能会有少量结晶析出，属于正常现象，37℃复溶后使用即可。

3．稀释bsa标准品：取120μl bsa标准品(5000μg/ml)（需完全融解），用与待测蛋白样品相一致的稀释液稀释至300μl，使终浓度为2000μg/ml。

注意：为方便起见，也可以用双蒸水，0.9%生理盐水或1×pbs缓冲液稀释标准品。

4．蛋白浓度测定：

①.稀释后的标准品按0，1，2，4，6，8，10，15，20μl分别加到96孔板中，加入用于稀释标准品的溶液补足到20μl（为避免枪尖损失，可先补足稀释液后加入标准品）；

4．将样品适当稀释（可以多作几个梯度，如2倍、4倍、8倍稀释），加20μl到96孔板的样品孔中；

5．各孔加入200µl显色工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30 min，冷却至室温；

6．注意：也可以室温放置2 h，或60℃放置30 min。Bca法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深，且显色反应会因温度升高而加快。如果蛋白浓度较低，可在较高温度孵育，或延长孵育时间。

7．④.用酶标仪测定每个样品及bsa标准品的od562，或540~590 nm的其它波长的吸光度，注意要减去空白对照（稀释液＋工作液）的吸光度。

8．⑤.绘制标准曲线，x轴为bsa蛋白标准品（mg/ml或µg/ml），y轴为各标准管对应的od562值，拟合曲线（eg.excel工具）并计算蛋白浓度。

9．注意：数据处理时需要去除明显错误的值。待测样品浓度可以从标准曲线中查得，实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出待测样品的浓度。

注意事项

1．本产品可以采用酶标仪（微孔检测法）或者分光光度计（试管检测法）测定蛋白浓度，如使用普通的分光光度计测定，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大bca工作液的用量使其不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少；

2．试剂在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使其溶解；

3．Bsa标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致（可用双蒸水、1×pbs或0.9%生理盐水进行稀释）；

4．建议每次测定蛋白样品时，都须绘制标准曲线；

5．Bca法检测样品中含有脂类物质时，光吸收值会偏高。样品中edta或葡萄糖浓度大于10 mm不能使用bca方法，葡萄糖浓度大于10 mm时可用改良lowry法蛋白定量试剂盒，edta大于10 mm的样品可用考染法蛋白质定量试剂盒。另外，蛋白质样品经液体样品蛋白抽提试剂沉淀后，可彻底去除干扰bca法、考染法和lowry法蛋白测定的物质。

6．所有未使用的储备液均应分装成单次使用的小份，配制完成后保存于-20°c，并避免反复冻融。

7．本产品仅限科研使用。