鼠尾直接PCR试剂盒（快速基因型鉴定），LK-2820

规格：200T / 500T 

保质期：12个月

产品背景介绍

本产品为鼠尾直接PCR试剂盒，专为小鼠、大鼠等啮齿类动物基因型快速鉴定而设计。试剂盒采用独特的组织裂解缓冲体系与高耐受性热启动聚合酶相结合的技术方案，无需进行传统的基因组DNA提取与纯化步骤。实验人员仅需剪取微量鼠尾或脚趾组织，经简单的裂解处理后，裂解液即可直接作为模板进行PCR扩增。

相较于传统酚氯仿抽提法或商业化的柱式DNA提取试剂盒，本试剂盒将基因型鉴定的全流程从数小时缩短至1小时以内，极大提升了实验通量和操作便捷性。试剂盒内预混的2×Direct PCR Mix含有优化配比的dNTP、Mg²⁺及高保真热启动Taq酶，能够有效克服组织裂解液中残留的蛋白质、脂质等PCR抑制物的干扰，确保扩增的特异性和稳定性。

产品特点

1. 免提取直扩：无需液氮研磨，无需柱式提取，组织裂解后直接取上清进行PCR，操作极简。

2. 高效裂解：优化的裂解缓冲液可在30分钟内快速释放组织基因组DNA，且裂解产物无需中和或纯化。

3. 强耐受性：2×Direct PCR Mix对SDS、胍盐及组织残留杂质具有超高耐受性，扩增成功率高。

4. 高保真扩增：采用热启动修饰酶，常温下无活性，避免非特异性扩增，条带清晰锐利。

5. 通量灵活：支持单管、8连管及96孔板反应体系，兼容各类PCR仪，适合小规模鉴定及大规模基因筛选。

产品内容

200T规格：

- 2×Direct PCR Mix（含染料）：1.0mL×2

- 组织裂解液：5mL

- 蛋白酶K：100μL

- 阳性对照模板（鼠尾gDNA）：50μL

- 阴性对照（ddH₂O）：1mL

500T规格：

- 2×Direct PCR Mix（含染料）：1.0mL×5

- 组织裂解液：12mL

- 蛋白酶K：250μL

- 阳性对照模板（鼠尾gDNA）：50μL

- 阴性对照（ddH₂O）：1mL

1000T规格：

- 2×Direct PCR Mix（含染料）：1.0mL×10

- 组织裂解液：25mL

- 蛋白酶K：500μL

- 阳性对照模板（鼠尾gDNA）：50μL

- 阴性对照（ddH₂O）：1mL

保存条件：2×Direct PCR Mix -20℃避光保存，反复冻融不超过10次。组织裂解液、蛋白酶K 4℃保存。阳性对照模板-20℃保存。未开封产品有效期12个月。

产品使用方法（仅供参考）

重要提示：剪取组织时使用灭菌剪刀，避免交叉污染。不同鼠尾样本间需用酒精棉擦拭剪刀并灼烧冷却。

一、组织裂解

1. 剪取1-3mm鼠尾尖端或脚趾组织，置于洁净PCR管或离心管底部。

2. 按每管50μL组织裂解液 + 1μL蛋白酶K的比例配制裂解工作液，充分混匀。

3. 每管加入50μL裂解工作液，确保组织完全浸没。

4. 将PCR管置于55℃孵育30分钟，随后转入95℃加热5分钟灭活蛋白酶K。

5. 短暂离心后，上清液即可作为PCR模板直接使用。如需长期保存，建议将裂解液转移至新管，-20℃冻存。

二、PCR反应体系配制

1. 在冰上按以下顺序配制PCR反应体系（单管20μL体系）：

   组分                    体积

   2×Direct PCR Mix       10μL

   上游引物(10μM)          1μL

   下游引物(10μM)          1μL

   组织裂解上清液（模板）  2μL

   ddH₂O                   6μL

   总体积                  20μL

2. 轻柔吹打混匀，短暂离心收集管壁液体。

3. 设置阳性对照（以试剂盒提供阳性模板为模板）、阴性对照（以ddH₂O为模板）及空白对照。

三、PCR扩增程序

1. 将PCR管放入PCR仪，按以下程序运行：

   步骤        温度    时间      循环数

   预变性      94℃    3分钟     1

   变性        94℃    30秒

   退火        55-60℃ 30秒      35

   延伸        72℃    1kb/分钟

   终延伸      72℃    5分钟     1

   保温        4℃      ∞        1

2. 退火温度根据引物Tm值调整，通常设置为55-60℃。延伸时间根据目的片段长度设定，本酶扩增速度约1kb/分钟。

四、电泳检测

1. 2×Direct PCR Mix已预添加电泳指示染料，PCR产物可直接上样进行琼脂糖凝胶电泳。

2. 推荐使用1.0%-2.0%琼脂糖凝胶，电压100-120V，电泳20-30分钟。

3. 紫外凝胶成像系统观察结果，与阳性对照及DNA Marker比对确认基因型。

产品使用注意事项

1. 组织用量：鼠尾组织用量不宜过大，1-3mm即可。组织过多会抑制裂解效率并引入过量PCR抑制物。

2. 裂解时间：55℃裂解30分钟为推荐条件，若组织较硬或个体较大可适当延长至45分钟。95℃灭活务必满5分钟，残留蛋白酶K活性会影响PCR效率。

3. 模板用量：20μL体系中裂解上清液用量建议为1-2μL。用量过多可能导致扩增失败或条带弥散。

4. 引物设计：扩增片段长度建议控制在200-1500bp之间，过长的片段可能因模板中存在微量抑制物而扩增效率下降。

5. 防污染措施：鼠尾剪取、裂解液配制、PCR体系配制建议在分区实验室进行。实验结束后使用核酸清除剂清洁台面。

6. 试剂保存：2×Direct PCR Mix反复冻融不应超过10次，建议首次使用时按单次用量分装冻存。

常见问题解答（FAQ）

Q1：PCR扩增无条带或条带极弱？

A1：请排查以下原因：(1)组织裂解不充分，延长55℃裂解时间至45分钟；(2)模板用量不足或过多，调整上清用量至2μL；(3)引物设计或稀释有误，重新确认引物序列及浓度；(4)延伸时间不足，按1kb/分钟重新计算延伸时间；(5)组织样本在裂解液中放置过久导致DNA降解，裂解后尽快进行PCR。

Q2：阴性对照出现条带？

A2：阴性对照出现条带表明存在核酸污染。请检查：(1)ddH₂O是否被污染，更换新开封无菌水；(2)移液器枪头是否为带滤芯无菌枪头；(3)操作台面及移液器是否残留核酸，使用核酸清除剂彻底清洁。

Q3：条带弥散或有大量非特异性扩增？

A3：(1)退火温度过低，尝试提高退火温度2-3℃；(2)循环数过多，减少至30-32个循环；(3)模板中含有PCR抑制物，减少裂解上清用量至1μL或对裂解液进行2倍稀释后使用。

Q4：同一窝小鼠出现基因型结果不一致或异常？

A4：首先确认引物特异性及亲本基因型。若引物及亲本无误，可能为剪取组织时发生交叉污染。建议每只鼠使用独立的灭菌器械，或采用一次性的无菌刀片取样。

Q5：裂解后的样本可以保存多久？

A5：裂解上清液在4℃可稳定保存1周，-20℃可保存至少3个月。长期保存建议将未裂解的组织直接冻存于-80℃，临用前再行裂解。

产品声明

1. 用途限制：本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断、治疗、食品、药品或存放于普通住宅内。

2. 实验风险告知：由于科研实验本身具有探索性、未知性和多变量特性，若实验涉及珍贵样本，请务必自行开展小规模预实验，确认本产品效果满足实验要求后，再应用于大批量关键实验。

3. 售后范围：本产品售后服务仅限产品本身质量问题，对于因使用本产品造成的任何间接损失、样本损耗或数据偏差，本公司不承担任何连带责任。购买即视为同意此条款。

4. 安全操作：为了您的安全与健康，操作时请穿实验服并佩戴一次性手套和口罩。