超敏ECL发光液，LK-6366

产品介绍  

本产品是一种基于增强化学发光（Enhanced Chemiluminescence, ECL）原理的高灵敏度、高稳定性免疫印迹（Western Blot, WB）检测试剂。其核心原理是在辣根过氧化物酶（HRP）的催化下，发光底物发生氧化还原反应并产生光信号。本试剂中的增强剂可极大放大光信号，使其强度提高数百倍，从而实现皮克（pg）甚至飞克（fg）级别的极低丰度蛋白检测。

本品为即用型工作液，由A液（含发光底物）和B液（含过氧化氢和增强剂）组成，使用时等体积混合即可，操作简便，性能稳定。

产品特点  

1.  超高灵敏度： 可检测低至皮克（pg）级别的目标蛋白，远高于常规ECL试剂。

2.  信号强度高： 优化的增强体系能产生强烈且持久的光信号，利于弱信号的捕获。

3.  信噪比优异： 背景低，显影条带清晰锐利，无扩散拖尾现象。

4.  稳定性强： 2-8°C条件下可稳定保存12个月，混合后的工作液在室温下数小时内保持稳定。

5.  适用范围广： 适用于各种膜（PVDF膜、NC膜等）的化学发光检测。

6.  即用型设计： 无需复杂配制，A、B两液等体积混合后即可使用。  

使用方法（仅供参考）  

实验前准备：

   已完成二抗（HRP标记）孵育和洗涤的蛋白膜。

   化学发光成像系统或X光片压片系统。

   避光使用的容器（如EP管）和移液器。

操作步骤：

1.  工作液配制： 根据待测膜的面积，在避光的容器中等体积混合A液和B液（例如：100μL A液 + 100μL B液）。注意： 现用现配，混合后请在4小时内使用。

2.  孵育： 用镊子将洗涤后的蛋白膜从TBST中取出，用滤纸轻轻吸去边缘多余液体（勿使膜完全干燥）。将膜蛋白面朝上，均匀滴加配好的ECL工作液，确保完全覆盖膜表面，室温孵育1-3分钟。

3.  显影：

       化学发光成像系统： 用镊子将膜取出，再次吸去多余工作液，将其置于成像系统样品板上，选择相应的化学发光程序进行检测和图像采集。

       X光片压片： 将膜用保鲜膜包好，蛋白面朝上放入暗盒中。在暗室中将其与X光片压紧，根据信号强弱曝光数秒至数分钟。随后取出X光片进行显影、定影操作。

4.  优化： 首次实验建议进行不同时间的曝光，以确定最佳曝光条件，避免信号过强或过弱。  

注意事项  

1.  避光操作： 本品对光敏感，在储存、配制和使用过程中应注意避光，以防底物失效。

2.  现用现配： 混合后的工作液会随时间衰减，请根据用量配制，并在4小时内使用完毕，以保证最佳效果。

3.  避免污染： 取用A液和B液时请使用干净的吸头，严禁交叉使用，以免污染整瓶试剂，导致失效。

4.  膜的处理： 孵育前请确保膜经充分洗涤，且不过度干燥，否则会导致高背景或信号缺失。

5.  安全说明： 本品含有刺激性化学成分，请佩戴手套和实验服操作。如不慎接触皮肤或眼睛，请立即用大量清水冲洗并寻求医疗帮助。

6.  储存： 务必于2-8°C冰箱避光保存，请勿冷冻，冷冻会导致试剂失效。  

常见问题解答  

Q1: 为什么信号非常弱甚至没有信号？

   原因一： 目标蛋白含量过低，超出检测范围。建议增加上样量或尝试更高灵敏度的抗体。

   原因二： 一抗或二效价低或失效。建议验证抗体活性。

   原因三： HRP酶失活。避免使用含叠氮钠（NaN₃）的缓冲液，因其会抑制HRP活性。

   原因四： 工作液配制比例错误、放置过久或已被污染。

Q2: 为什么背景很高？

   原因一： 一抗或二抗浓度过高。建议进行抗体滴度测试，优化稀释比例。

   原因二： 膜封闭不充分或洗涤不彻底。建议延长封闭时间，增加洗涤次数和时长。

   原因三： 曝光时间过长。尝试缩短曝光时间。

Q3: 混合后溶液是什么颜色？正常吗？

   混合后的A液和B液可能呈现淡黄色或淡蓝色，这属于正常现象，不影响使用效果。

Q4: 工作液可以重复使用吗？

   不可以。 工作液为一次性使用，重复使用会导致灵敏度显著下降和背景升高。

Q5: 试剂出现沉淀或颜色异常加深怎么办？

   这可能意味着试剂已变质或受到污染，建议停止使用。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。