Western及IP裂解液（LK-6288）

产品介绍

Western及IP裂解液（Western and IP lysis buffer ）是一种非变性裂解细胞/组织样品,提取的总蛋白可以用于PAGE、Western、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（co-IP）和ELISA等实验。本产品能保护蛋白完整性同时，有效抑制蛋白降解，维持原有的蛋白间相互作用。

实验步骤（仅供参考）

实验前准备

1.室温融解Western及IP裂解液，混匀。

2. 使用前数分钟内加入PMSF至终浓度1mM，或根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

细胞样本提取

1. 贴壁细胞去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗涤一次（血清蛋白无干扰时可省略）。注意：悬浮细胞离心收集细胞，轻轻vortex或弹击管底使细胞分散。

2. 按6孔板每孔100-200ul的比例加入裂解液。

注：6孔板每孔细胞通常需100ul裂解液。高密度细胞可增至150-200ul。

3. 用移液器吹打数次使裂解液与细胞充分接触。

4. 动物细胞通常1-2秒即可裂解，植物细胞需冰上裂解2-10分钟。

5. 轻弹管底使细胞充分裂解（应无可见细胞沉淀）。

6. 细胞量多时需分装成50-100万细胞/管后再裂解。

7. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟。取上清用于后续实验。

组织样本提取

1.样品预处理：将组织剪切成细小碎片。

注：25mg动物内脏组织用200ul-300ul裂解液。

组织裂解

方法一：匀浆/研磨法

1. 按每25mg组织加入200-300ul裂解液（可根据需要调整用量）。

2. 使用玻璃匀浆器或组织研磨仪研磨至充分裂解。

3. 或先液氮研磨组织，再加入裂解液裂解。充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟。取上清用于后续实验。

方法二：直接裂解法

1. 细小组织样品可直接加入裂解液。

2. 强烈vortex使样品裂解充分。

3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟。取上清用于后续实验。

注意事项

1. 蛋白浓度测定：必须使用BCA法，不可使用Bradford法。

2. 抑制剂添加：PMSF需现用现加，避免失效。

3. 裂解充分性：大团细胞/菌体需充分分散以确保裂解效果。

4. 植物/微生物样品：可能需要延长裂解时间或预处理。

5. 组织样品：匀浆/研磨法裂解效果优于直接裂解法。

6. 离心条件：必须达到10000-14000g以确保去除细胞碎片。

7. 样品保存：裂解后样品应尽快使用，避免反复冻融。

8. 安全操作：含Triton X-100等成分，操作时需做好防护。

9. 涉及蛋白酶或者磷酸酶实验时，根据情况酌情不加对应酶抑制剂，操作请在冰上操作。

产品声明

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.我公司所有产品仅限科学研究实验使用，严禁其他用途，因用于其他用途引起的人身财产安全事故，本公司概不负责。

3.由于科研实验本身存在不确定性和失败风险，对于珍贵样本务必谨慎使用，或者使用前请用普通样本做预实验，确保实验条件和方案成熟，以免对珍贵样本造成不可挽回的浪费和其他实验损失。产品如遇质量问题，售后仅限产品本身，不涉及连带其他任何赔偿。

4.介于科研实验的样本类型复杂性，实验因素多样性，本产品提供的产品说明书仅供参考，如所需实验与本说明书提供的实验信息不一致，请自行查阅文献。