DiD 染料(远红外细胞膜荧光染料），LK-1508

产品介绍 

DiD 染料是亲脂性荧光染料家族成员之一，它可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当 DiD 与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散， 最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiD（远红色荧光）可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiD 可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比 DiI 更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。常作为细胞膜荧光染料、神经元顺行和逆行示踪、细胞长期示踪。DiD 染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用 0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地进行质膜染色。λEx/λEm(MeOH) = 644/663 nm 。

外观：可溶于乙醇、DMF 和 DMSO 的深蓝色固体 。

产品保存： -20℃ 避光保存，保质期 12 个月。

实验步骤

1. DiD 染色液的制备

1.1 制备储备液

溶剂选择:使用二甲基甲酰胺 (DMF)、二甲基亚砜 (DMSO) 或乙醇作为 DiD 的溶剂。DMF 优于乙醇。储备液的浓度应为 1-5 mM，储备液应立即使用。未使用的溶液应等分并冷冻保存于-20℃。避免重复冷冻/解冻循环，溶液可保存6个月。

1.2 准备工作液

稀释:将储备液稀释到合适的缓冲液中，如无血清培养基、HBSS 或 PBS,制成 1~5 μM 的工作液。工作液不建议存放超过24h;工作溶液的最终浓度应根据不同的细胞类型和/或实验条件根据经验确定。

2.悬浮细胞染色步骤

2.1 细胞准备：1000g 4℃ 离心 3-5 分钟，弃上清,用 PBS 洗涤细胞 2 次，每次 5 分钟。

最后调整细胞密度至 1x10⁶/mL。

2.2 染色：加入 1 mL DiD 工作液，室温孵育 5-30 分钟。4℃，400 g离心 3-4分钟，弃上清。用 PBS 洗涤细胞 2 次，每次 5 分钟。用无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞。

2.3 观察：用荧光显微镜或流式细胞术观察染色后的细胞。

3.贴壁细胞染色步骤

3.1 细胞培养：在无菌细胞爬片（或者共聚焦培养板/皿）上培养贴壁细胞。

3.2 染色：在细胞爬片（或者共聚焦培养板/皿）上加入 100 μL 工作液，轻摇使之完全覆盖细胞，室温孵育 5-30 分钟。洗涤 2 次，每次 5 分钟。

3.3 观察：用荧光显微镜或流式细胞术观察染色后的细胞。

注意事项

1.避免光照:DiD 是光敏染料，操作时应尽量避免暴露在强光下，以减缓荧光淬灭。

2.细胞活性:染色过程中应确保细胞活性，避免长时间孵育导致细胞损伤浓度优化，不同细胞类型和实验条件可能需要优化 DiD 工作液的浓度；染色固定的细胞或组织样品时，样品宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。  

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。