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紫外核酸染料(10,000× 水溶液),LK-7060
产品简介
紫外核酸染料是一种高效、安全、稳定的核酸染色剂,适用于多种电泳染色方法。其无毒性、高灵敏度和高稳定性使其成为EB的理想替代品。通过胶染法或泡染法,可以灵活选择适合自己实验需求的染色方法。
储存条件:4℃避光保存,可保存12个月。
产品规格:500ul;5ml
产品特点
1. 无毒性:独特的油性和大分子量特性使其无法穿透细胞膜进入细胞内。艾姆斯氏试验表明,其诱变性远低于EB(溴化乙锭)。
2. 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色。对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
3. 稳定性高:适用于微波或其他加热方法制备琼脂糖凝胶。在室温下的酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强。
4. 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
5. 操作简单:与EB一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解。电泳后染色只需30分钟,无需脱色或冲洗,可直接用紫外凝胶透射仪观察。
6. 适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法)。适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳。可用于dsDNA、ssDNA或RNA染色。
7. 与EB有相同的光谱特性:无需改变滤光片及观察装置。标准的EB滤光片或SYBR滤光片都适用。在300nm紫外光附近可得到最佳激发。不推荐使用488nm氩离子激光器或相似波长的可见光激发。
使用方法(参考)
#1. 胶染法(推荐方法)
步骤:
1.1. 制胶时加入紫外核酸染料:
- 例如:每50mL琼脂糖溶液中加入5μL紫外核酸染料10,000×储液。
1.2. 按照常规方法进行电泳。
注意事项
- 染料用量相对较少。500μL染料大约可以做100块50mL的胶。
- 紫外核酸染料具有良好的热稳定性,可直接加入热的琼脂糖溶液中。
- 摇晃、振荡或翻转以保证染料充分混匀。
- 也可将染料储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后加热制备琼脂糖凝胶。
- 如果条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法确认问题是否与染料有关。
- 此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
#2. 泡染法
步骤:
2.1. 按照常规方法进行电泳。
2.2. 制备3×染色液:
- 用H2O将紫外核酸染料10,000×储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中。
- 例如:将15μL紫外核酸染料10,000×储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中。
2.3. 染色:
- 将凝胶放入合适的容器中,加入足量的3×染色液浸没凝胶。
- 室温振荡染色30分钟左右,最佳染色时间根据凝胶厚度和琼脂糖浓度略有不同。
注意事项:
- 泡染法染色时,染料用量较多。
- 单次使用的染色液可重复使用3次左右。
- 3×染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。
- 在极少数情况下,质粒经某些酶切后的 DNA 样品会出现拖尾和分辨率降低,此时建议同时尝试两种染色方法 以决定哪种方法更加合适。
名称 | 灵 敏 度 | 稳 定 性 |
对 DNA 迁移的影响 |
安全性 |
适用性 |
紫外核酸染料 |
高 |
高 |
条带不弯曲,DNA 片段不迁移 | 1 是一种独特的油性大分子,不易挥发 升华,不易吸入人体,不能穿透细胞 膜进入活体细胞内,安全无毒。 2 艾姆斯氏测试结果表明,紫外核酸染料在 凝胶染色浓度下完全没有诱变性,因 此完全 没有致癌毒性。 | 通用大小片段电泳染色,与 EB 有相同的光谱特性,无需改变滤 光片及观察装置。标准的 EB 滤 光片或 SYBR 滤光片都适用, 使用普通紫外凝胶透射仪观察 即可,在300nm 紫外光附近可得 到最佳激发。 |
蓝光核酸染料 |
高 |
高 |
条带不弯曲,DNA 片段不迁移 | 1 是一种独特的油性大分子,不易挥 发升华,不易吸入人体,不能穿透细 胞膜进入活体细胞内,安全无毒。 2 艾姆斯氏测试结果表明,CelGreen 在凝胶染色浓度下完全没有诱变性, 因此完全没有致癌毒性。 |
通用大小片段电泳染色,适用于 使用254nm激发的紫外凝胶透 射仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
SYBR Green I |
高 |
低 | 染料浓度较高时, 条带容易弯曲, DNA 片段迁移的 现象明显 | 属花菁染料,能透过细胞膜进入活体细 胞内,但容易生物降解,不会在体内残 留,安全无毒。 | 100bp 以上电泳染色,适用于使 用254nm激发的紫外凝胶透射 仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
EB |
低 |
高 |
条带不弯曲,DNA 片段不迁移 | 1 分子量小,易挥发升华,易吸入人 体,不易生物降解,在体内长期残留。 2 艾姆斯氏测试结果表明,EB 容易引 起有机体突变,是一种强诱变剂,具 有高致癌性。 |
100bp 以上电泳染色,背景荧光 信号高;使用普通紫外凝胶透射 仪观察。 |
Goldvi ew |
低 |
高 |
条带不弯曲,DNA 片段不迁移 | 1 主要成分为吖啶橙,是一种煤焦油 提取物,具有高毒,致癌,高诱变性。 2 易挥发升华,易吸入人体,能穿透 细胞膜进入活体细胞内,不易生物降 解,在体内长期残留。 | 100bp 以上电泳染色,背景荧光 信号高;适用于使用254nm激发 的紫外凝胶透射仪或可见光凝 胶透射仪观察。 |