肿瘤组织消化液（类器官专用），H10013

产品介绍  

本产品是一款经过精心优化、专为肿瘤组织来源类器官培养而设计的酶消化液。它能够高效、温和地降解肿瘤组织中的细胞外基质（如胶原蛋白、纤维连接蛋白等），同时最大限度地维持肿瘤细胞（包括肿瘤干细胞）的活力与增殖潜能，从而获得高质量的单细胞或微小细胞团悬液，用于后续的类器官原代构建、传代培养及药敏筛选等研究。  

产品特点  

1.  高效专一消化：独特优化的酶组合配方，能特异性地靶向降解人类肿瘤组织中的复杂基质，消化效率高，解离时间短，减少对细胞的损伤。

2.  卓越细胞活性：内含保护剂和稳定因子，在消化过程中有效维持细胞膜完整性，保障解离后细胞的高存活率（通常 >90%）和高克隆形成能力。

3.  保持细胞异质性：温和的消化过程有助于保留肿瘤组织内部的多种细胞类型（如上皮细胞、干细胞、免疫细胞等），更好地模拟体内肿瘤的异质性。

4.  低DNA酶活性：有效水解消化过程中释放的DNA，极大减轻细胞悬液的粘稠度，避免细胞因缠绕而结团，便于后续的计数、铺板和培养。

5.  无菌即用型：溶液经过 0.22 μm 滤膜无菌过滤，无需配制，可直接使用，方便快捷，保证实验结果的稳定性和可重复性。

6.  无动物源成分：产品生产过程中无任何动物源成分添加，降低外源因子污染风险，适用于临床前研究。  

使用方法（仅供参考）  

注意： 以下为通用实验流程，最佳消化时间需根据具体肿瘤类型（如癌、肉瘤）、组织纤维化程度和新鲜度进行优化。

实验前准备：

   将消化液从-20°C取出，置于冰上或4°C冰箱缓慢解冻，或于37°C水浴中快速解冻（解冻后请立即置于冰上）。

   预热水浴锅至37°C。

   准备预冷的类器官基础培养液（如AIM、AdDF++等）或PBS用于终止消化。

组织消化流程：

1.  组织处理：在无菌条件下，将新鲜的肿瘤组织（通常1-5 cm³）转移至培养皿中，用预冷的PBS（含1%双抗）充分清洗，去除血污和坏死组织。用无菌手术剪或刀片将组织剪切成1-3 mm³的微小碎块。

2.  加入消化液：将组织碎块转移至一个无菌的离心管或锥形瓶中。按组织体积 : 消化液体积 ≈ 1 : 5 - 1 : 10的比例加入预热的消化液（例如，0.5 mL组织加入5 mL消化液）。

3.  孵育消化：

       将离心管置于37°C恒温水浴摇床中，以80-120 rpm的转速轻柔振荡消化。

       消化时间通常在30分钟至2小时之间，需密切观察。可每隔20-30分钟取出观察，当组织变得浑浊，液体内可见大量小细胞团或单细胞时，即可终止。

       提示：可用1000 μL移液器（剪去尖头）轻柔吹打数次，以加速组织分散。

4.  终止消化：当大部分组织被消化后，加入等体积的预冷含血清培养液或PBS（血清可抑制酶活）终止反应。

5.  过滤与收集：将细胞悬液依次通过100 μm和40 μm的细胞筛网，以去除未消化完全的大块组织和小细胞团，收集单细胞和微小细胞团（< 40 μm）悬液。

6.  清洗细胞：将过滤后的细胞悬液于4°C， 200-500 × g 离心 5分钟，弃去上清。用预冷的类器官基础培养液重悬细胞并再次离心洗涤一次。

7.  细胞计数与铺板：用合适的培养液（如含B27、Noggin、EGF等因子的类器官培养液）重悬细胞沉淀，进行活细胞计数（推荐使用台盼蓝排除法）。按所需密度将细胞与Matrigel®基质胶混合，点板于预热的培养板中，固化后添加类器官培养基于37°C、5% CO₂培养箱中培养。  

注意事项  

1.安全操作：所有操作应在无菌生物安全柜中进行，穿戴好个人防护装备。处理人类肿瘤组织需遵守相关生物安全规定。

2.组织新鲜度：组织的新鲜程度直接影响消化效率和细胞活性，建议在离体后4-6小时内开始处理。

3.优化是关键：消化时间是最关键的参数，过度消化会严重损害细胞活性。对于纤维化严重的组织（如胰腺癌），可适当延长消化时间；对于较软的组织（如某些乳腺癌），需缩短时间。首次实验建议设置不同时间点进行摸索。

4.轻柔操作：在吹打和离心过程中，动作务必轻柔，避免对细胞造成机械损伤。

5.避免反复冻融：建议将消化液分装成小份 aliquot 后冻存，每次使用一管，以保持酶活性。  

常见问题解答  

Q1: 消化后细胞成团严重，粘稠度很高怎么办？

A: 这通常是由于细胞死亡释放基因组DNA所致。建议：

1.  在消化液中额外添加终浓度为 10-50 μg/mL 的DNA酶I，并在消化过程中轻柔吹打。

2.  缩短消化时间，避免过度消化导致过多细胞死亡。

3.  使用更大孔径的移液器尖头进行吹打，减少剪切力。

Q2: 消化后细胞存活率很低是什么原因？

A: 可能原因包括：

1.  消化过度：延长了消化时间，需缩短时间或降低酶浓度。

2.  组织不新鲜：离体后放置过久，细胞已大量死亡。

3.  机械损伤：吹打或离心过程过于剧烈。

4.  消化液反复冻融导致失效。请使用新解冻的 aliquot。

Q3: 消化后无法形成类器官怎么办？

A: 类器官形成失败不一定是消化液的问题，可能涉及：

1.  细胞活性本身不足：参见Q2。

2.  后续培养条件不佳：类器官培养基配方、基质胶质量、细胞铺板密度等因素更为关键。

3.  组织类型：并非所有肿瘤类型都容易建成类器官。

Q4: 该产品可以用于消化非肿瘤组织吗？

A: 本产品是针对肿瘤组织（通常基质更坚硬、更复杂）优化的，对于正常的癌旁组织或其他正常组织可能过于强烈，可能导致消化过度。建议为正常组织使用更温和的消化酶（如低浓度的胶原酶）。

Q5: 如何确定最佳消化时间？

A: 最好的方法是进行时间梯度实验。取等量组织分装到多管中，在相同条件下分别消化20、40、60、90分钟，然后比较各时间点的细胞得率、存活率和后续的类器官形成效率，以确定最优时间。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。