红细胞裂解液（类器官专用），H10016

产品介绍  

本产品是一款专为类器官培养流程设计的无菌、无酶、无动物源成分的红细胞裂解液。在类器官原代构建或传代过程中，从组织消化获得的细胞悬液中常含有大量红细胞，这些红细胞会竞争营养、干扰显微观察、影响细胞计数准确性并可能释放有害物质。本品能选择性、快速地裂解红细胞，同时完美保留有核细胞（包括类器官干细胞）的活性和功能，为获得高纯度的类器官培养起始细胞群提供关键保障。  

产品特点  

1.  高效特异性裂解：基于优化浓度的铵盐原理，可高效裂解无核的红细胞，同时对有核的类器官细胞损伤极小，细胞活性保留率高（>95%）。

2.  卓越的兼容性：配方专为类器官细胞设计，经过多种来源（如肠、肝、肺、肿瘤组织）类器官细胞测试，确保在有效裂解红细胞的同时，不影响类器官干细胞的成球能力和增殖潜能。

3.  操作迅速温和：室温下操作，裂解反应可在5-10分钟内完成，避免了长时间孵育对敏感细胞造成的压力，整个流程温和、快速。

4.  即用型无菌溶液：经过0.22 μm滤膜无菌过滤，无需配制、稀释或额外添加任何成分，可直接使用，简化实验步骤，减少污染风险。

5.  无动物源成分（Animal-Free）：生产过程中无任何动物源成分添加，极大降低了引入外源病毒、支原体等污染的风险，符合高标准类器官研究的需求。

6.  结果一致性高：使用本品后可获得更纯净的细胞群体，提高细胞计数的准确性，从而确保每次铺板的细胞密度一致，提升类器官培养成功率与实验的可重复性。  

使用方法（仅供参考）  

注意： 最佳裂解时间需根据红细胞的数量进行微调。对于红细胞含量极高的样本（如某些肿瘤组织），可适当延长裂解时间或重复裂解一次。

实验前准备：

   将红细胞裂解液从常温储存处取出，平衡至室温（15-25°C）。

   准备预冷的PBS或类器官基础培养液（用于终止反应和清洗）。

   准备好离心机，设置离心条件为：4°C, 300 × g, 5分钟。

裂解流程：

1.  制备细胞悬液：按照标准流程完成组织消化，并将消化后的细胞悬液通过细胞筛网过滤，收集到离心管中。

2.  离心洗涤：将细胞悬液在 4°C, 300 × g 离心 5分钟，小心弃去上清。

3.  重悬细胞：用手指轻弹离心管底，将细胞沉淀松散开。用预冷的PBS重悬细胞并再次离心洗涤一次，尽可能去除上清。

4.  加入裂解液：向细胞沉淀中加入1-2 mL 室温的红细胞裂解液（对于红细胞含量较多的样本，可按 1:5 至 1:10 的比例添加，即1份细胞沉淀加入5-10份裂解液）。用移液器轻柔吹打或涡旋振荡3-5秒，使细胞与裂解液充分混匀。

5.  孵育裂解：将离心管置于室温（15-25°C） 下孵育 5-10分钟。期间可轻柔颠倒混匀1-2次。密切观察，当溶液由浑浊的红色变为清澈透明（或淡粉色），且管底细胞沉淀变小（主要为有核细胞）时，即为裂解完成。

6.  终止反应：立即向管中加入至少3-5倍体积的预冷PBS或培养液（例如，加入1 mL裂解液，则加入5 mL PBS）以稀释并终止裂解反应。

7.  离心收集：立即在 4°C, 300 × g 离心 5分钟，小心弃去含有血红蛋白的上清（红色）。

8.  最终清洗：用预冷的类器官基础培养液或PBS重悬细胞，再次离心洗涤一次，确保彻底去除裂解液残留。

9.  后续操作：用适量的类器官完全培养液重悬细胞沉淀，进行细胞计数，随后与基质胶混合进行铺板培养。

注意事项  

1.无菌操作：所有步骤均需在无菌超净工作台中进行，避免微生物污染。

2.控制时间：切勿超过建议的裂解时间（通常不超过15分钟）。过长的孵育时间会对有核细胞造成损伤。

3.轻柔混匀：在裂解过程中，避免剧烈涡旋或吹打，以免机械损伤有核细胞。

4.及时终止：裂解完成后，应立即加入大量预冷缓冲液终止反应。

5.保持低温：终止和清洗步骤务必使用预冷的液体并在4°C下离心，以最大程度保护细胞活性。

6.预实验建议：对于非常珍贵或新型的组织样本，建议先取一小部分细胞悬液进行裂解时间梯度测试（如5, 10, 15分钟），以确定最佳条件。

常见问题解答  

Q1: 裂解后细胞团块还是红色的，说明红细胞没裂解干净怎么办？

A: 这通常意味着红细胞含量过高或裂解不充分。建议：

1.  将细胞沉淀重新用新鲜的红细胞裂解液重悬，再重复裂解步骤一次，时间控制在5分钟左右。

2.  适当增加首次裂解时裂解液的用量或延长孵育时间（但总时间勿超15分钟）。

Q2: 裂解后我的有核细胞存活率下降很多，可能是什么原因？

A: 可能原因包括：

1.  裂解时间过长：这是最常见的原因，请严格控制在10分钟以内。

2.  离心力过大：确认离心力为300 × g，过高的离心力会压死细胞。

3.  未使用预冷液体终止：常温下裂解反应会持续，必须用预冷PBS及时终止和清洗。

4.  样本本身细胞活性差：消化过程可能已对细胞造成损伤。

Q3: 裂解后细胞得率很低是怎么回事？

A: 除了Q2中提到的细胞死亡原因，还可能是在清洗步骤中操作不当，吸弃了松散的细胞沉淀。弃上清时务必小心，最好在吸液前保留少量上清以免吸走细胞。

Q4: 本品可以用于裂解冻存样本复苏后的红细胞吗？

A: 可以。本品同样适用于冻存后细胞悬液中的红细胞去除。操作流程与新解离的细胞相同。

Q5: 本品与其他公司的通用红细胞裂解液有什么区别？

A: 本品是专为类器官细胞优化的。通用裂解液可能浓度较高或配方不同，对某些敏感的类器官干细胞可能存在潜在毒性，影响其成球效率。本品经过测试，在有效裂解红细胞的同时，能最大程度地保护类器官干细胞的干性和功能。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。