线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒（微量法），LK-1352

产品介绍  

本试剂盒用于检测动植物组织或细胞样本中的线粒体呼吸链复合体 I（NADH-CoQ 还原酶） 的活性。该酶是线粒体电子传递链中的关键酶，催化 NADH 脱氢生成 NAD⁺，其活性可反映细胞呼吸状态和活性氧生成水平。

本试剂盒采用微量法，适用于 96 孔板或分光光度计检测，操作简便，灵敏度高，重复性好。

产品特点  

1.高灵敏度：基于 NADH 在 340 nm 处吸光度变化，检测下限低。

2.适用范围广：适用于动物、植物组织及培养细胞。

3.操作简便：试剂即用型或易配制，流程标准化。

4.配套齐全：提供完整试剂组分，支持自动与手动计算。

使用方法（仅供参考）  

1. 试剂准备

- Reagent I、II、III、V：使用前平衡至室温。

- Working Reagent VI：临用前用去离子水溶解，分装保存，避免反复冻融。

2. 样本制备

1. 取约 0.1 g 组织或 5×10⁶ 个细胞，加入 1 mL Reagent I 和 10 μL Reagent III，冰浴匀浆。

2. 600 g、4℃ 离心 5 min，取上清。

3. 11000 g、4℃ 离心 10 min，沉淀为线粒体，上清为胞浆提取物（可选测）。

4. 用 200 μL Reagent II 和 2 μL Reagent III 重悬沉淀，冰上待测。

3. 检测步骤

1. 酶标仪预热至 340 nm。

2. 配制工作液：198 μL Reagent IV + 2 μL Reagent V，37℃ 或 25℃ 孵育 5 min。

3. 依次加入：10 μL 样本 + 200 μL 工作液 + 15 μL Working Reagent VI，迅速混匀。

4. 立即读取 0 min 和 2 min 时的吸光度值（A₁ 和 A₂），计算 ΔA = A₁ - A₂。

4. 结果计算

- 按样本质量：  

  总活性（U/g） = 3654 × ΔA₁ / W + 731 × ΔA₂ / W

- 按细胞数量：  

  总活性（U/10⁴ cells） = 7.31 × ΔA₁ + 1.46 × ΔA₂

也可使用在线计算工具输入数值自动计算。  

注意事项  

1.试剂 IV 有毒性，试剂 V 有刺激性，请在通风橱中操作。

2.穿戴实验服、手套、口罩等防护用具。

3.建议预实验验证样本活性范围，避免 ΔA 过高或过低。

常见问题解答  

Q1：ΔA 值过高或过低怎么办？  

A：若 ΔA > 0.4，需稀释样本；若 ΔA < 0.001，可增加样本量或体积。若为负值，可能样本中无活性酶或已降解。

Q2：多个样本同时检测是否影响结果？  

A：建议每次检测 2–3 个样本，加样后立即混匀检测，避免反应平衡后出现负反应。

Q3：样本是否可以保存？  

A：新鲜样本最佳，若需保存，请于 -80℃ 存放，一个月内使用。  

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。