正常胃类器官培养基 & 培养试剂盒

产品信息

- 正常胃类器官培养基货号: H2016-100 / H2016-500

- 正常胃类器官培养试剂盒货号: H2016K-100 / H2016K-500

一、 产品组成与储存

备注：以上所有组分均可单独购买。

试剂到货处理建议：

- 培养基：到货后4℃保存，为保持最佳性能，建议1个月内使用完毕。

- 组织保存液 & 原代组织消化液：内含营养成分，长期不用建议-20℃储存。

二、 操作流程详解

2.1 组织前处理与运输

1.  准备：预冷的原代缓冲液、组织保存液、冰袋、取样管。

2.  获取与运输：

    - 组织离体后30分钟内放入组织保存液中。

    - 用原代缓冲液清洗3-5次，去除表面血液。

    - 将组织完全浸没于组织保存液，4℃低温运输（72小时内送达实验室）。

2.2 类器官原代培养（以24孔板为例）

1.  组织清洗与修剪：

    - 在超净台中，将组织转移至培养皿，用原代缓冲液反复吹打清洗。

    - 用眼科剪和镊子去除杂质，并将组织机械剪切成1-3 mm³的小块。

2.  组织消化：

    - 将组织块转移至15 mL离心管，加入5 mL 肠/胃组织消化液。

    - 4℃震荡消化25-30分钟，期间每10分钟在显微镜下观察。

- 当观察到大量70 μm以下的细胞簇或单个细胞时（参考图一），即可终止消化。

图一：组织消化成较多隐窝

3.  过滤与收集：

    - 涡旋15秒，加入3倍体积的原代缓冲液终止消化。

    - 用100 μm细胞筛网过滤，并用10-20 mL原代缓冲液冲洗筛网。

    - 300 g，离心5分钟，弃上清。若沉淀有红细胞，可加入1-2 mL红细胞裂解液处理1-2分钟，再用缓冲液稀释后离心。

4.  基质胶重悬与接种：

    - 根据细胞沉淀的体积（参考图二）按照如图细胞沉淀量分别加入 300 ul 、250ul 、150 ul 、100 ul 基质胶，按1:25的比例加入基质胶重悬（避免气泡）。

    - 在24孔板中每孔点入25-30 μL胶滴（全程在冰上操作）。

    - 将培养板放入37℃培养箱10-15分钟，使基质胶凝固。

- 每孔小心加入750 μL 正常胃类器官培养基，置于37℃培养箱中培养。

图二：细胞沉淀体积量与对应基质胶添加量参考

2.3 类器官传代培养

1.  选择时机：类器官培养约一周，大小在100-200 μm，且每孔数量超过20个。

2.  收集与清洗：

    - 吸弃旧培养基，每孔加入等体积的传代缓冲液，轻柔吹散基质胶。

    - 收集至15 mL离心管，4℃静置10-15分钟。

    - 300 g，离心5分钟，弃上清。

3.  消化（可选）：

    - 若类器官较大或数量多，可加入1-2 mL类器官消化液，室温消化2-4分钟，每隔1分钟吹打20次。

    - 显微镜下观察，消化至类器官变小、结构松散时（参考图三），加入3倍体积的传代缓冲液终止消化，再次离心弃上清。

4.  重悬与接种：步骤同原代培养的“基质胶重悬与接种”。

图三：类器官传代消化程度图

2.4 类器官冻存

1.  按传代步骤收集类器官，离心后弃上清。

2.  每3个孔的类器官沉淀用2 mL类器官冻存液重悬，分装至冻存管（每管1 mL）。

3.  使用程序降温盒，放入-80℃冰箱。

4.  48小时后，可转移至液氮罐中长期保存。

2.5 类器官复苏培养

1.  从低温环境中快速取出冻存管，置于37℃水浴中轻柔摇晃至完全融化。

2.  将内容物转移至15 mL离心管，用传代缓冲液轻柔吹打稀释。

3.  300 g，离心5分钟，弃上清。

4.  用120 μL基质胶重悬每管冻存的类器官，按每孔25-30 μL点胶，后续步骤同原代培养。

三、 基质胶使用指南

- 解冻：提前24小时置于4℃冰箱过夜解冻。

- 操作：全程在冰上进行，防止提前凝固。

- 凝固：放入37℃培养箱中，10-15分钟即可凝固。

- 特点：4℃下稳定性好（可达14天），凝固后强度高，易于操作和去除。

用途声明

*For Laboratory Research Use Only. Not For Use In Diagnostic Procedures.*

*本产品仅用于实验室研究，不用于诊断程序。*