耳蜗组织解离试剂盒，LK-1270

产品简介

本产品适用于耳蜗组织细胞悬液的分离制备，本产品利用酶温和、快速有效地破坏细胞外基质，释放细胞，从而生成单细胞悬浮液。制备的单细胞悬液可用于单细胞测序、细胞培养或其他细胞相关检测

注意事项:

1. 离心机务必使用水平离心机，并设置合适的参数，避免因操作不当影响实验结果。

2. 本产品为无菌产品，请穿实验服并佩戴一次性手套，注意无菌操作，避免微生物污染。

3. 使用前需确保试剂完全融化并混匀。

自备材料：

1. 仪器：水浴锅（定期手动摇晃混匀）或杂交炉（转速 20 ~ 30 转/分钟）、水平离心机。

2. 试剂：PBS、FBS、RPMI 1640 培养基。

3. 耗材：低吸附枪头、5 mL 和 15 mL 离心管、70 μm 细胞筛。

使用方法：

1.准备工作：水浴锅或杂交炉设置到 37℃、配制含 5% FBS 的 PBS。切取新鲜组织约 200 mg（黄豆粒大小）

2.取一个 5 mL 离心管，加入 240 µL 耳蜗组织解离液和 2760 µL 的RPMI 1640 培养基，混匀。2. 将组织样本用 PBS 清洗干净，充分剪碎，并转移到第 1 步准备好的溶液中，颠倒混匀。

3.放在 37℃水浴锅或杂交炉中 0.5 h ~ 2 h。消化过程中，使用水浴锅每隔3 ~ 5 min 手动摇晃混匀。使用杂交炉转速 20 ~ 30 转/分钟左右。

4.每隔一定的时间质检一次细胞悬液，根据细胞总量及活性等确定消化终止时间。

5.消化完成后，用 70 μm 细胞筛过滤细胞悬液，收集滤液于 15 mL 离心管中。

6. 加 3 mL RPMI 1640 培养基于消化的离心管中，上下颠倒涮洗管壁，涮洗液经过同一个70 μm 细胞筛进行过滤，收集滤液于第 5 步的 15 mL 离心管中。

7. 重复步骤 6 两次，共洗 3 次，共收集滤液 12 mL。

8. 将收集液于 4℃，300 ×g 离心 5 min，弃上清。

9. 用 5 mL 含 5% FBS 的 PBS 重悬沉淀，吹打混匀，4℃，300 ×g 离心5 min，弃上清。

10. 重复步骤 9 一次，共清洗两次。

11. 用 50 µL ~ 2 mL 含 5% FBS 的 PBS 重悬沉淀，根据所需的细胞浓度调整重悬液的体积。

12. （可选择步骤）若要去除红细胞，可使用红细胞裂解试剂盒。

13. 用细胞计数仪对细胞悬液进行质控并记录。质控结束后请立即进行后续实验。

备注：1. 若得到的细胞悬液中有红细胞，按需决定是否进一步去除红细胞。2. DMEM 培养基可替代 RPMI 1640 培养基。