即用型DAPI溶液，LK-7120

产品介绍  

本产品为即用型DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）染色溶液，是一种经过优化的、可直接用于细胞核染色的工作液。DAPI是一种能够与DNA双螺旋 minor groove 区域特异性结合的荧光染料，尤其偏好AT碱基对。在与DNA结合后，其荧光强度会显著增强。

DAPI的主要激发波长为~358 nm（紫外光），发射波长为~461 nm（蓝色荧光）。它是最常用、最经典的细胞核复染剂和细胞凋亡检测染料之一，广泛应用于细胞生物学、遗传学、肿瘤学等研究领域，适用于细胞涂片、组织切片（石蜡切片、冰冻切片）等的细胞核染色。

产品特点  

1.即开即用:预先配制好最佳工作浓度，无需稀释、混匀等复杂步骤，节省时间，减少操作误差。

2.高灵敏度:对DNA具有高亲和力，染色清晰，背景低。

3.卓越稳定性:优化配方，在推荐条件下可稳定保存12个月。

4.兼容性强:与多种组织固定方法（如多聚甲醛、乙醇）和封片剂（如水性、甘油基或抗淬灭封片剂）兼容。

5.多色标记兼容： 蓝色荧光与FITC（绿色）、Cy3/TRITC（红色）等常用荧光染料的发射光谱重叠较小，非常适合进行多色荧光标记实验。

使用方法（仅供参考）  

实验前准备：经过固定和透化（如需要）的细胞涂片或组织切片。防淬灭封片剂。

染色步骤：

1.  样品准备： 确保您的细胞或组织样品已经过固定和必要的透化处理。对于石蜡切片，请先完成脱蜡、水化及抗原修复（如需要）等步骤。

2.  染色：在样品上直接滴加足量的即用型DAPI染色液，确保完全覆盖所有待观察区域。

   室温下避光孵育 5 - 15 分钟。 （建议起始孵育时间为10分钟，可根据染色强度调整）

3.  清洗：倾去或用移液器吸掉DAPI溶液。使用 1X PBS缓冲液 (pH 7.4) 或去离子水轻轻冲洗样品2-4次，每次浸泡1-2分钟，以去除未结合的染料，降低背景。

4.  封片与观察：用滤纸吸去多余的液体，但注意勿使样品完全干燥。滴加一滴抗淬灭封片剂于载玻片上，轻轻盖上盖玻片，避免产生气泡。即可在荧光显微镜下，使用适合DAPI的紫外激发滤光片进行观察和图像采集。

用量：细胞涂片/24x50 mm盖玻片：约100-200 µL。组织切片：确保液体完全覆盖组织，通常为50-100 µL。  

注意事项  

1.  避光操作： DAPI对光敏感，在整个染色过程及后续储存中，请务必注意避光，以减缓染料淬灭。

2.  个人防护： DAPI是一种已知的诱变剂，可能对眼睛、皮肤和呼吸道造成刺激。操作时请佩戴手套、穿实验服，并在通风良好的环境下进行。避免吸入和接触皮肤。

3.  废液处理： 实验后的废液和清洗液应作为有害化学废液处理，请遵守您所在机构的废弃物处理规定。

4.  储存条件： 务必在2-8°C下避光保存，请勿冷冻，冷冻可能导致染料沉淀，影响染色效果。

5.  优化建议： 对于不同类型的样品，最佳的染色时间可能有所不同。建议初次使用时进行时间梯度摸索，以获得信噪比最佳的染色结果。

6.  仪器校准： 确保荧光显微镜的UV光源和滤光片系统工作正常，以获得准确的荧光信号。  

常见问题解答  

Q1: 染色背景过高是什么原因？

   A1: 可能原因包括：

       染色后清洗不充分，请增加清洗次数或时间。

       染色时间过长或染料浓度过高（本产品为即用型，通常排除浓度问题）。

       样品自身有较多凋亡或坏死细胞，导致DNA片段化，产生非特异性结合。

Q2: 细胞核信号很弱或没有信号？

   A2: 可能原因包括：染色时间太短。样品固定过度或固定剂不当，影响了DAPI与DNA的结合。荧光显微镜的UV光源老化或滤光片配置不正确。样品中细胞数量过少。

Q3: DAPI可以用于活细胞染色吗？

   A3: DAPI是膜透性染料，可以进入活细胞。但通常不推荐用于专一的活细胞核染色，因为它对活细胞的毒性较大，且染色效率低于死细胞。它更常用于固定后细胞的染色，或用于区分死/活细胞（死细胞因膜完整性丧失而染色更强）。

Q4: 本产品可以用于流式细胞术吗？

   A4: 可以。用于流式细胞术时，建议在染色后使用PBS重悬细胞，并通过细胞筛网制成单细胞悬液，然后上机检测。染色步骤与显微成像类似。

Q5: DAPI的蓝色荧光和其他绿色/红色荧光通道会发生串色吗？

   A5: DAPI的发射光谱较窄，与FITC和Cy3的重叠很小。但在进行多色标记时，仍需注意光谱溢出的可能性。建议使用仪器的光谱拆分功能或设置合适的单染对照，以进行补偿调节。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。