Recombinant GST Tag protein，RPG10210

产品介绍  

本产品是通过基因工程技术，将目标基因与谷胱甘肽S-转移酶（GST）的基因进行融合，并在大肠杆菌系统中高效表达后，经亲和层析纯化获得的高纯度、高活性重组蛋白。GST标签（约26 kDa）不仅有助于提高融合蛋白的可溶性和稳定性，更为后续的纯化、检测和相互作用研究提供了极大的便利。

产品特点  

1.  高纯度: 通过优化的纯化工艺，产品纯度经SDS-PAGE检测通常 > 95%。

2.  高活性: 保留完整的GST酶活性，能够高效地与谷胱甘肽（GSH）配基结合。

3.  稳定性好: 提供在-80°C的稳定储存缓冲液中，经多次冻融后仍能保持大部分活性（建议避免反复冻融）。

4.  便捷易用: 可直接用于GST亲和树脂的结合，或作为阳性对照用于Western Blot、ELISA等实验。

5.  严格质控: 每一批次产品都经过SDS-PAGE纯度分析、Western Blot特异性检测和活性测定，确保产品质量的稳定性和可靠性。  

使用方法（仅供参考）  

注意： 以下为通用实验方案，具体条件请根据您的实验体系进行优化。

1. 储存与复溶:

   储存条件: -80°C 冻存。推荐使用前快速置于冰上融化。

   稀释缓冲液: 建议使用1X PBS（pH 7.4）或您特定的实验缓冲液进行稀释。避免使用含有高浓度还原剂（如DTT、β-巯基乙醇）的缓冲液，以免破坏GST蛋白的空间结构。

2. GST Pull-down 实验（示例）:

   a. 准备谷胱甘肽琼脂糖珠: 取适量谷胱甘肽琼脂糖珠悬液，用预冷的结合缓冲液（如1X PBS）洗涤2-3次。

   b. 结合: 将适量（通常为1-10 µg）的本GST标签蛋白与处理好的琼脂糖珠在4°C下缓慢摇荡孵育30-60分钟。

   c. 洗涤: 离心后弃上清，用预冷的洗涤缓冲液（如含0.1% Triton X-100的PBS）洗涤珠子3-5次，彻底去除未结合的蛋白。

   d. 与靶蛋白孵育: 加入含有潜在相互作用蛋白的细胞裂解液，在4°C下继续孵育1-2小时。

   e. 洗脱与检测: 充分洗涤后，使用含有还原型谷胱甘肽（10-20 mM）的洗脱缓冲液将结合的复合物从珠子上洗脱下来。收集洗脱液，进行SDS-PAGE和Western Blot分析。

3. 作为阳性对照:

   Western Blot: 在SDS-PAGE上样时，加入50-200 ng的本产品作为阳性对照。使用抗GST抗体进行检测，应在约 56 kDa（GST标签26 kDa + 您的目标蛋白分子量） 处出现单一清晰的条带。

   ELISA: 可作为包被抗原，用于检测抗GST抗体或您目标蛋白抗体的效价。  

注意事项  

1.  储存与处理: 本品应在-80°C条件下保存。为避免反复冻融导致蛋白变性失活，建议在首次使用时将产品分装成小管储存。操作请在冰上进行。

2.  无菌操作: 虽然本品不含防腐剂，但建议在无菌条件下操作，以防微生物污染。

3.  缓冲液兼容性: 避免在强变性剂（如8M尿素、6M盐酸胍）或强酸、强碱条件下使用，这会不可逆地破坏蛋白活性。谨慎使用还原剂。

4.  个人防护: 本品仅用于科研，不可用于人体、临床诊断或药物使用。操作时请穿着实验服并佩戴手套。

5.  实验优化: 不同批次的活性可能存在细微差异，建议在关键实验中预先进行剂量梯度实验以确定最佳使用量。  

常见问题解答  

Q1: 我的GST Pull-down实验背景很高，可能是什么原因？

   A1: 可能原因包括：

       非特异性结合: 增加洗涤缓冲液中的盐浓度（如NaCl至150-500 mM）或加入非离子去污剂（如0.1%-0.5% Triton X-100/NP-40）。

       珠子过量: 减少琼脂糖珠的使用量。

       蛋白过量: 降低GST标签蛋白或细胞裂解液的用量。

       裂解液太“脏”: 确保细胞裂解液经过充分离心，去除不溶性杂质。

Q2: 在Western Blot中，为什么我的GST标签蛋白出现了多条带或大小不对？

   A2:

       多条带: 可能是蛋白部分降解（注意操作在冰上进行，并加入蛋白酶抑制剂）或发生了翻译后修饰（如磷酸化）。

       大小不对: GST标签本身约26 kDa，计算分子量时应加上您目标蛋白的分子量。此外，某些蛋白的异常迁移是正常现象。

Q3: 我可以将GST标签切除吗？

   A3: 可以。在构建表达载体时，可以在GST标签和您的目标蛋白之间加入特异的蛋白酶酶切位点（如凝血酶、PreScission Protease或Xa因子）。纯化出GST融合蛋白后，可用相应的蛋白酶进行酶切，然后再过一次谷胱甘肽琼脂糖珠以去除被切下的GST标签和未切开的完整融合蛋白，从而获得无标签的目标蛋白。

Q4: 蛋白溶解度下降或出现沉淀怎么办？

   A4: 在冰上缓慢解冻，避免剧烈涡旋。可通过低速离心（如12,000g，10分钟）去除不溶性沉淀，取上清用于后续实验。在储存缓冲液中加入适量甘油（5-10%）可能有助于提高稳定性。

Q5: 如何确定蛋白的浓度？

   A5: 我们提供的产品通常会标明浓度。您也可以使用BCA法或Bradford法等蛋白定量方法进行测定。请注意，不同测定方法可能存在偏差。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。