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  • C024275 脂多糖(LPS)
  • C024275 脂多糖(LPS)

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产品描述

脂多糖LPS),C024275

产品介绍  

脂多糖(LPS),又称内毒素,是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的主要组成部分。本品是从大肠杆菌 0111:B4 菌株中通过酚提取法或其他纯化工艺精制而得的高纯度 LPS

LPS 分子由三部分组成:

1.  O-特异性多糖链:负责菌体抗原特异性。

2.  核心多糖:结构相对保守。

3.  类脂ALPS 的生物活性中心,是其主要毒性成分。

本品是免疫学和细胞生物学研究中至关重要的工具分子,主要用于模拟细菌感染,强力激活哺乳动物的免疫系统,特别是通过 Toll 样受体 4 (TLR4) 信号通路,诱导巨噬细胞等免疫细胞产生大量的炎症因子(如 TNF-α, IL-1β, IL-6)。

产品特点  

1.  高纯度与高活性:采用标准工艺提取纯化,内毒素活性单位(EU)高,批次间稳定性好,确保实验结果的可靠性与重复性。

2.  明确的来源与血清型:来源于明确的大肠杆菌 O111:B4 血清型,背景清晰,适用于需要特定来源 LPS 的研究。

3.  强大的免疫刺激能力:其类脂A结构能高效激活 TLR4/MD-2 受体复合物,是研究天然免疫、炎症反应的经典激动剂。

4.  广泛的应用范围:适用于体外细胞培养(刺激巨噬细胞、树突状细胞等)和体内动物模型(如诱导败血症休克、炎症模型)。

5.  严格的质检:通过 LAL(鲎试剂)法测定内毒素活性,并通过无菌测试等确保产品质量。  

使用方法(仅供参考)  

1. 储存与配制

   储存:收到产品后,应置于 -20°C 或更低温干燥保存。长期储存建议分装,避免反复冻融。

   母液配制:

       推荐使用无菌、无热原的生理盐水或细胞培养级水进行配制。

       建议先配制浓度为 1 mg/mL 的储备母液。

       由于 LPS 易产生静电且易漂浮,开盖前请先短暂离心,并在通风橱或洁净工作台中小心操作。

       将溶剂加入粉末中,通过剧烈涡旋(可能需要数分钟)或短暂超声(冰浴中进行,避免过热)使其完全溶解,形成均一、轻微浑浊的胶体溶液。

       配制好的母液应根据使用量进行分装,并于 -20°C 冻存。

2. 工作液使用

   体外细胞刺激:

       使用前,将母液解冻并涡旋混匀。

       根据实验设计,用无血清或完全细胞培养基将其稀释至所需的工作浓度。

       常用刺激浓度范围:100 ng/mL - 1 μg/mL。对于原代巨噬细胞,通常 100 ng/mL 即可引起强烈的炎症反应。具体浓度需根据细胞类型和实验目的进行优化。

       将含有 LPS 的工作液加入细胞培养体系中,刺激特定时间(如 61224 小时)后,收集上清液检测细胞因子或收取细胞进行分子生物学分析。

体内动物实验:

       用无菌、无热原的生理盐水或 PBS 稀释至所需浓度。

       注射剂量:剂量因动物品系、年龄、体重和模型目的(如轻度炎症或重度败血症)差异巨大。

       常用剂量范围:1 - 20 mg/kg 体重。例如,用于小鼠败血症模型,剂量可能高达 10-20 mg/kg(腹腔或静脉注射)。

       注意:体内实验必须经过预实验确定合适剂量,并严格遵守动物伦理规范。

注意事项  

1.  安全警告:脂多糖对人体具有潜在健康风险。吸入、皮肤接触或吞食可能导致发热、炎症反应(“流感样”症状)及其他毒性效应。操作时务必做好防护。

2.  无菌操作:

       本品非无菌包装。如需用于细胞培养,建议使用 0.22 μm 的滤膜过滤除菌。请注意,LPS 可能形成聚合物而无法通过滤膜,导致浓度损失。也可在配制后通过紫外线照射或其他物理方法灭菌。

       所有接触物品(吸头、离心管等)应确保无热原。

3.  避免污染:LPS 极其稳定且难以降解。实验过程中应使用专用区域和器材,避免交叉污染其他实验样品,尤其是细胞培养和蛋白表达等系统。

4.  个人防护:操作粉末或高浓度母液时,必须在通风橱中进行,并佩戴手套、实验服、口罩和护目镜。

5.  废物处理:所有接触过 LPS 的废弃物应作为生物危险废物处理,并通过高压灭菌(121°C, 至少 30 分钟)进行灭活。  

常见问题解答  

Q1: 为什么我的 LPS 溶液是浑浊的?

A: 这是正常现象。LPS 在水溶液中会形成胶束或聚合物,导致溶液呈现轻微浑浊或半透明状,并不影响其生物活性。剧烈涡旋或短暂超声可改善其分散性。

Q2: 我应该如何确定用于我细胞的最佳刺激浓度和时间?

A: 建议进行剂量梯度(例如:10, 100, 500, 1000 ng/mL)和时间梯度(例如:2, 6, 12, 24 小时)实验。通过检测下游指标(如 TNF-α 的分泌量或 NF-κB 的活化水平)来确定最佳条件。

Q3: 我的细胞对 LPS 没有反应,可能是什么原因?

A: 可能原因有:细胞类型不表达 TLR4 受体(如 HEK293 原始细胞系)。血清中含有抑制成分。胎牛血清(FBS)的质量和批次可能影响 LPS 活性,可尝试使用低内毒素或无内毒素的血清。LPS 储存不当或反复冻融导致活性下降。工作浓度过低。

Q4: 本品能否用于不含细胞的生化实验?

A: 可以。但请确保实验体系(如缓冲液、器皿)无热原,以避免背景干扰。

Q5: 如何灭活 LPS

A: 常规的湿热高压灭菌(121°C30分钟)可以有效灭活 LPS 的生物活性。强酸、强碱或氧化剂也可使其失活。

产品声明
本产品仅限于科研,如需储存珍贵样本,请自行小规模尝试后大批量实验,产品售后仅限产品本身,无其他任何连带责任,请须知

本产品仅供研究使用,不适用于临床诊断或治疗。