等温扩增变色检测试剂盒(LAMP/RT-LAMP法, 含UDG），LK-2021

产品介绍  

本试剂盒是一种基于环介导等温扩增（LAMP）或逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）技术的核酸检测试剂盒，并整合了尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG）防污染体系。其核心原理是针对靶基因的6个特定区域设计4-6条特异性引物，在恒定温度（60-65℃）下，利用具有链置换活性的DNA聚合酶进行高效、特异的核酸扩增。

反应体系中预混有显色染料，该染料可与扩增过程中产生的大量副产物——焦磷酸镁沉淀结合，导致溶液颜色发生肉眼可见的显著变化（如从橙红色变为亮黄色）。因此，用户无需开盖，也无需依赖任何复杂仪器，仅通过观察颜色变化即可快速判断结果，非常适用于现场快速检测、基层筛查及资源有限环境下的病原体检测、转基因鉴定、物种鉴别等。

UDG防污染原理： 反应体系中包含dUTP和UDG酶。在扩增过程中，dUTP会掺入新合成的DNA链，替代部分dTTP，使扩增产物成为“含U DNA”。在后续检测中，若存在既往扩增产物的气溶胶污染，UDG酶可在常温孵育步骤中将其切割降解，而天然模板DNA不受影响。随后，在预变性阶段UDG酶失活，再进行新一轮的目标基因扩增，从而有效防止假阳性结果。

产品特点  

1.  快速简便： 恒温扩增，无需昂贵的PCR仪；结果肉眼可视，无需电泳或荧光检测设备。

2.  高灵敏度与特异性： LAMP法针对6个区域设计引物，特异性极高；其扩增效率高，灵敏度可达拷贝级。

3.  强抗干扰能力： 对样品中常见抑制剂（如肝素、血红素等）的耐受性优于常规PCR。

4.  内置防污染（含UDG）： 有效降低因扩增产物污染导致的假阳性风险，保证结果可靠性。

5.  预混液体系： 将酶、Buffer、dNTPs（含dUTP）、显色染料等优化预混，只需加入模板和引物即可，减少操作步骤与误差。

6.  应用广泛： 既可进行DNA靶标检测（LAMP模式），也可进行RNA靶标检测（RT-LAMP模式，试剂内含逆转录酶）。  

使用方法（仅供参考）  

A. 试剂盒组成（以25次反应为例）

   2× LAMP/RT-LAMP Master Mix (含UDG， dUTP, 显色染料) : 625 μL × 1管

   UDG酶 (5 U/μL) : 已预混于Master Mix中

   引物干粉/混合液： [请根据具体检测项目说明] × 1套

   无核酸酶水： 1 mL × 1管

   阳性对照 (PC)： 1管

   阴性对照 (NC)： 1管

B. 实验前准备

1.  将试剂盒各组分（除引物外）从-20℃取出，置于冰上完全融化，使用前轻微涡旋混匀并短暂离心。

2.  根据检测项目说明书，用无核酸酶水将引物干粉溶解并混合成指定浓度的引物工作液。

3.  准备好已提取的模板DNA或RNA。

C. 反应体系配置（以单管25μL体系为例，推荐在冰上操作）

注：具体引物种类、浓度及添加体积，请务必遵循具体检测项目的操作指南。

D. 反应程序

1.  UDG处理（防污染步骤）： 将配置好的反应管置于25-37℃孵育5-10分钟，以降解可能存在的含U污染产物。

2.  扩增反应： 直接将反应管转移至恒温金属浴或水浴锅中，于60-65℃（根据引物设计优化）孵育20-40分钟。

3.  结果判读： 反应结束后，勿开盖，直接观察管内液体颜色变化。

       阳性结果： 溶液颜色由橙红色变为亮黄色。

       阴性结果： 溶液颜色保持橙红色不变或略有变浅。

       无效： 阳性对照未变黄或阴性对照变黄，则本次实验无效，需重新检测。  

注意事项  

1.  分区操作： 严格遵守分子实验室分区原则（试剂准备区、样本制备区、扩增及产物分析区），防止污染。即使有UDG防污染体系，也应保持良好的操作习惯。

2.  模板质量： 确保模板核酸的纯度和完整性，避免过度降解。RNA模板操作时需注意防止RNase污染。

3.  温度控制： 恒温设备的温度均匀性和准确性至关重要，建议使用校准过的金属浴。

4.  避免开盖： 扩增完成后，严禁在产物分析区开盖观察，以免产生气溶胶污染。颜色判读应闭管进行。

5.  引物保存与使用： 引物干粉应于-20℃长期保存，溶解后的工作液建议分装短期使用，避免反复冻融。

6.  对照设置： 每次实验必须同时设立阳性对照和阴性对照，以监控整个实验过程的有效性。

7.  光线影响： 观察颜色时，应在自然光或白光下进行，避免在强彩色光线下判读。

8.  废物处理： 所有反应后的管及Tip头应作为生物污染废物统一收集并高压处理。  

常见问题解答  

Q1: 反应后颜色变化不明显，或呈浑浊的淡黄色，如何判读？

A1: 这可能与模板浓度过低、反应时间不足或体系抑制剂过强有关。建议：

       延长反应时间至45-60分钟观察。

       将反应管离心后，在白色背景下从管底观察。

       若仍无法判断，可视为“疑似阳性”，建议重新提取模板复测，或使用其他方法（如qPCR）验证。

Q2: 阴性对照管也变黄了，可能是什么原因？

A2: 这提示存在污染，可能原因包括：

       试剂或环境污染：  Master Mix、水或引物被核酸污染。请更换新批次试剂或新配制试剂，彻底清洁工作台。

       气溶胶污染： 过往扩增产物泄露。加强分区操作，启用实验室的紫外消毒。本试剂的UDG步骤可降解大部分含U污染，但对不含U的污染物无效。

       交叉污染： 加样时模板间发生交叉污染。请规范操作，使用带滤芯的枪头。

Q3: 阳性对照不变色，可能是什么原因？

A3: 这提示反应体系失效，可能原因包括：

       温度不正确： 恒温设备温度不准，请用温度计校准。

       试剂失效或操作错误： 确认Master Mix是否反复冻融或过期，加样量是否准确，特别是引物。

       酶失活： 反应液在高温下放置过久，或反复冻融导致酶活性下降。

Q4: 本试剂盒可以用于实时荧光检测吗？

A4: 不可以。本试剂盒为闭管显色法，预混的是可与焦磷酸镁沉淀结合的显色染料，并非嵌入双链DNA的荧光染料（如SYBR Green I）。若需进行实时荧光定量LAMP检测，请选购专用的荧光法LAMP试剂盒。

Q5: 如何选择LAMP模式还是RT-LAMP模式？

A5: 本Master Mix已包含逆转录酶，为RT-LAMP Master Mix。当检测靶标为DNA时，它直接以LAMP模式工作；当检测靶标为RNA时，它自动先进行逆转录，再进行LAMP扩增，无需额外添加酶。您只需根据模板类型加入即可。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。