LXGen Blood DNA Extraction Kit (0.1-20ml),LK-2106

非柱式血液 DNA 提取试剂盒(0.1-20ml)，LK-2106

产品介绍  

本试剂盒采用独特的裂解/沉淀法（非离心柱技术），专门用于从人、动物抗凝全血（EDTA、柠檬酸钠、肝素抗凝）中快速提取高质量基因组DNA。其核心原理是通过高效裂解液释放细胞核内容物，选择性沉淀去除蛋白质、血红素等杂质，最后通过异丙醇沉淀获得纯净的基因组DNA。

本方法避免了柱式法中多次离心和转移的繁琐步骤，特别适合中高通量样本处理及大体积血液样本（如10-20ml） 的DNA提取，所得DNA适用于PCR、qPCR、酶切、Southern Blot、基因测序（NGS）等多种下游分子生物学实验。提供2种规格：100次（100ml）,200次（200ml）.

产品特点  

1.  高通量 & 大体积兼容：无需离心柱，可同时处理多个样本，轻松应对0.1ml至20ml不同体积的血液。

2.  高纯度与得率：有效去除血红素、蛋白质等PCR抑制剂，获得的DNA A260/A280比值通常在1.7-1.9之间，片段完整，得率高。

3.  快速高效：操作步骤简化，主要流程约在30-60分钟内完成，尤其适合大批量样本。

4.  经济实惠：省去了离心柱的成本，单位样本提取成本显著降低。

5.  灵活便捷：提取的DNA可溶解于TE缓冲液或无菌水中，浓度和体积可根据下游实验灵活调整。  

使用方法（仅供参考）  

实验前准备：提前将无水乙醇和异丙醇加入指定试剂瓶中，并将蛋白酶K（PK）干粉溶解于提供的储存液中。将洗涤液WB按标签指示加入指定体积的无水乙醇。

A. 常规量全血（0.1-1ml）提取流程：

1.  裂解：取0.1-1ml全血于无菌离心管中，加入等体积的裂解液LBA，立即充分涡旋混匀10-15秒，室温静置5-10分钟（直至溶液变透亮）。可轻微颠倒混匀数次。

2.  沉淀蛋白：加入0.5体积的沉淀液PRC（相对于初始血液体积），温和颠倒混匀10-15次，可见大量白色絮状沉淀。12,000 rpm离心5分钟。

3.  转移上清：小心将上清液（含DNA）转移至一个新的离心管中，避免吸入沉淀。

4.  沉淀DNA：向上清中加入等体积的异丙醇（室温），温和颠倒混匀50-60次，直至可见白色丝状DNA沉淀。12,000 rpm离心3分钟，小心弃去上清。

5.  洗涤：向DNA沉淀中加入1ml 70%乙醇（或试剂盒提供的洗涤液WB），轻柔颠倒数次洗涤沉淀。12,000 rpm离心2分钟，小心弃尽乙醇。

6.  干燥与溶解：将开盖的离心管室温或37℃温育5-10分钟，让残留乙醇挥发干净。根据下游实验需求，加入50-200μl TE缓冲液或无菌水，轻弹管壁或55-65℃温育10-20分钟助溶。

B. 大体积全血（1-20ml）提取流程：

1.  裂解与沉淀：按比例扩大裂解液LBA和沉淀液PRC的用量（参照A步骤1&2），在相应体积的离心管中操作。离心时间可适当延长至10分钟以确保沉淀完全。

2.  DNA沉淀与洗涤：转移上清后，使用0.7倍体积的室温异丙醇（而非等体积）进行沉淀，可减少共沉淀的盐分。后续洗涤步骤相同，但可根据沉淀量按比例增加洗涤液体积。

3.  溶解：大体积血液获得的DNA沉淀量较大，可适当增加溶解液体积（如200-500μl）并延长温育溶解时间。  

注意事项  

1.  本品仅供研究使用，不用于临床诊断。

2.  操作时应佩戴手套、口罩和护目镜，在生物安全柜或通风处进行，避免直接接触试剂。

3.  血液样本应尽可能新鲜（4℃保存不超过3天），长期保存请置于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

4.  肝素抗凝血可能影响提取效率和下游PCR，建议优先使用EDTA抗凝血。

5.  裂解后若溶液粘稠，可适当补加少量裂解液LBA或延长裂解时间。

6.  弃上清步骤需格外小心，避免丢失DNA沉淀。可用微量移液器吸除残留液滴。

7.  DNA沉淀不可过度干燥，否则极难溶解。轻微湿润状即可加液溶解。

8.  提取的DNA建议分装，长期保存请置于-20℃或-80℃。

常见问题解答  

Q1: 提取的DNA产量低或没有沉淀，可能原因是什么？

- A：① 血液样本不新鲜或保存不当，白细胞已降解；② 肝素抗凝血抑制了沉淀形成；③ 异丙醇沉淀时未充分混匀或温度过低（应室温）；④ 离心速度或时间不足；⑤ 弃上清时不小心丢掉了DNA沉淀。

Q2: DNA的A260/A280比值偏低（<1.7）或偏高（>2.0），如何处理？

- A：比值偏低表明有蛋白质污染，可能因沉淀步骤不充分或上清转移时吸入蛋白沉淀。可尝试用酚/氯仿重新抽提一次，或再次乙醇沉淀。比值偏高通常意味着RNA污染或DNA干燥过度，可加入适量RNase A消化，或确保沉淀不过干。

Q3: 下游PCR实验无扩增或抑制严重，怎么办？

- A：① 确保DNA已充分溶解，无细小沉淀残留；② 用TE缓冲液（pH 8.0）溶解优于无菌水；③ DNA中可能残留乙醇或盐分，可用70%乙醇再洗涤一次，并充分晾干；④ 建议在PCR体系中适当稀释DNA模板（如1:10），以稀释可能的抑制剂。

Q4: 如何处理非常大体积（>10ml）的血液？

- A：建议先进行红细胞裂解预处理：将血液与3-5倍体积的红细胞裂解液混合，冰浴15-20分钟，离心弃上清，收集白细胞沉淀。然后从上述流程的“裂解”步骤开始，使用白细胞沉淀进行操作，可大幅提高效率并减少试剂用量。

Q5: 提取的DNA有颜色吗？

- A：使用本试剂盒提取的DNA通常应为无色或极浅白色的溶解物。若溶解后呈淡黄色或棕色，可能洗涤不充分，残留血红素。可考虑增加一次70%乙醇洗涤步骤。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。