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Phospho-DRP1 (Ser616) Antibody,LK-201260
产品介绍
本品是一种兔源多克隆抗体,通过精心设计的磷酸化多肽进行免疫制备而成。该抗体能够特异性地识别并检测在丝氨酸616位点发生磷酸化的DRP1蛋白 (DRP1 (Ser616))。DRP1 (动力相关蛋白1) 是一种介导线粒体分裂的关键蛋白,其Ser616位点的磷酸化通常与线粒体分裂的激活、细胞周期进程以及某些疾病状态相关。
核心识别信息:
靶标蛋白: 磷酸化 DRP1 (Ser616)
蛋白编号: O00429
预测分子量: ~79 kDa / 82 kDa (实际观察值可能因物种、组织或磷酸化状态而异)
产品特点
1. 高特异性: 抗体经过磷酸化和非磷酸化多肽亲和层析柱的连续色谱纯化,确保其仅识别并结合在Ser616位点磷酸化的DRP1,对非磷酸化的DRP1或其他蛋白交叉反应性极低。
2. 经验证的应用: 已通过多种实验技术验证,适用于蛋白质免疫印迹 (WB)、免疫组织化学 (IHC) 和免疫荧光/细胞免疫化学 (IF/ICC)。
3. 广泛的物种反应性: 经验证可用于人、小鼠、大鼠的样本。生物信息学预测与猪、牛、马、羊、兔、狗等物种具有高同源性,具体反应性需实验验证。
4. 高质量纯化: 源自兔血清,经亲和纯化获得,纯度高,背景低。
5. 明确的引用标识: 提供标准的学术引用格式,方便您在发表论文时正确引用。
使用方法(仅供参考)
重要提示: 最佳稀释比例和使用条件因实验系统(样本类型、处理方式、检测仪器等)而异,建议用户根据预实验确定最佳条件。抗体反复冻融或多次使用可能导致效价降低,不建议重复使用。
应用 | 推荐起始稀释比例 | 实验建议 |
蛋白质免疫印迹 (WB) | 1:1000 - 1:3000 | 适用于变性蛋白样本。建议使用 RIPA 或类似裂解液提取总蛋白,并使用含磷酸酶抑制剂的裂解液以防止去磷酸化 |
免疫组织化学 (IHC) | 1:50 - 1:200 | 适用于石蜡包埋切片 (IHC-p) 或冰冻切片 (IHC-f)。建议进行抗原修复 |
免疫荧光 / 细胞化学 (IF/ICC) | 1:100 - 1:500 | 适用于固定后的细胞样本。使用合适的封闭液和含去垢剂的通透液 |
ELISA (检测抗原肽) | 待优化 | 适用于直接检测磷酸化多肽 |
实验操作简述(以WB为例):
1. 样本制备: 提取组织或细胞总蛋白,进行SDS-PAGE凝胶电泳。
2. 转膜: 将蛋白转移至PVDF或NC膜上。
3. 封闭: 用5%脱脂牛奶或BSA的TBST缓冲液室温封闭1小时。
4. 孵育一抗: 用封闭液按推荐起始比例稀释本抗体,4°C孵育过夜。
5. 洗涤: TBST缓冲液洗涤膜3-5次,每次5分钟。
6. 孵育二抗: 加入相应的HRP标记抗兔二抗,室温孵育1小时。
7. 洗涤: TBST缓冲液再次充分洗涤。
8. 检测: 使用ECL化学发光底物进行显影检测。
注意事项
1. 保存条件: 本品为液体形式,溶于PBS缓冲液(含0.02%叠氮钠和50%甘油)。收到后请立即 -20°C 保存,避免反复冻融。在此条件下,产品自收货之日起可稳定保存12个月。
2. 安全提示: 本品含叠氮钠,有毒。操作时请穿戴实验服和手套,避免直接接触皮肤或眼睛。
3. 对照设置: 为验证实验特异性,建议同时设置:
阳性对照: 已知表达p-DRP1 (Ser616)的细胞或组织样本。
阴性对照: 使用非磷酸化的DRP1蛋白或已知不表达该磷酸化蛋白的样本。
实验对照: 使用相同样本,用不含一抗的缓冲液孵育,以排除二抗非特异性结合。
4. 样本处理: 在进行磷酸化蛋白检测时,务必在裂解液中添加足量的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,以最大程度保护蛋白不被降解和去磷酸化。
5. 抗体稀释: 使用前请短暂离心。根据实验需求,用推荐的抗体稀释液(如含1% BSA的TBST)进行稀释。剩余未用完的稀释抗体不建议回收保存。
常见问题解答
Q1: 为什么我的WB结果中没有信号或信号很弱?
A: 可能的原因包括:① 目标蛋白在所测样本中表达量低或无磷酸化;② 抗体稀释比例过高,尝试提高抗体浓度(如从1:3000降至1:500);③ 样本处理不当,磷酸化蛋白发生降解或去磷酸化,请确保使用新鲜样本和抑制剂;④ 曝光时间不足;⑤ 转膜效率低,建议检查转膜效果。
Q2: WB条带出现多条或分子量不符?
A: DRP1存在不同的剪接变体或翻译后修饰(如磷酸化、泛素化),可能导致多条带。~79/82kDa是其主要条带位置。非特异性条带可能源于二抗或封闭不充分,可优化封闭条件和二抗浓度。
Q3: 抗体可以用于免疫沉淀 (IP) 或染色质免疫沉淀 (ChIP) 吗?
A: 本说明书仅验证了WB、IHC、IF/ICC和ELISA(肽)的应用。未经验证的应用(如IP、ChIP、流式细胞术)不保证效果,如需尝试,需用户自行优化条件。
Q4: 如何引用此抗体?
A: 建议的引用格式为:LK-201260,LinGKeBio,China。请在论文的“材料与方法”部分注明。
Q5: 产品的别名有哪些?
A: 靶标蛋白DRP1也被称为:DNM1L, DLP1, DVLP, DYNIV, Dynamin-1-like protein, Dynamin-related protein 1 等。详细列表见产品数据页。
产品声明
本产品仅限于科研,如需储存珍贵样本,请自行小规模尝试后大批量实验,产品售后仅限产品本身,无其他任何连带责任,请须知。
本产品仅供研究使用,不适用于临床诊断或治疗。