NP-40裂解液，LK-6102

产品介绍  

NP-40细胞裂解液是一种温和的非离子型去垢剂裂解液，其主要活性成分NP-40能有效溶解细胞膜和核膜，同时保持蛋白质之间的天然相互作用。该裂解液适用于从哺乳动物细胞中提取总蛋白、胞浆蛋白及核蛋白（需配合特定步骤），并能最大限度地保持蛋白的抗原性和生物活性，特别适合用于免疫共沉淀（Co-IP）、免疫荧光（IF）、报告基因检测以及转录因子活性分析等对蛋白完整性要求较高的实验。  

产品特点  

1.  温和高效：  NP-40能温和地破碎细胞膜，释放胞浆内容物，对蛋白复合物和膜蛋白的干扰较小。

2.  兼容性广：  裂解产物可直接用于多种下游应用，包括BCA/Bradford法蛋白定量、SDS-PAGE、Western Blot、免疫沉淀等。

3.  即用型配方：  本品为即用型工作液，无需稀释，使用方便。

4.  灵活配置：  基础配方不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂，用户可根据实验需求（如研究磷酸化信号）自行添加相应的抑制剂，灵活性高。

使用方法（仅供参考）  

实验前准备：

   将裂解液预冷至4℃。

   根据实验需求，在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂（如PMSF至终浓度1 mM）和/或磷酸酶抑制剂。

   准备预冷的PBS。

   所有操作请在冰上或4℃环境下进行，以抑制蛋白降解。

细胞样品裂解步骤（以贴壁细胞为例）：

1.  细胞收集：  吸弃培养皿中的培养基，用预冷的PBS轻柔漂洗细胞两次，彻底吸净残留的PBS。

2.  加液裂解：  按每10⁶个细胞加入100-200 μL裂解液的比例，向培养皿中加入适量预冷的NP-40裂解液（含抑制剂），使裂解液均匀覆盖细胞。

3.  冰上孵育：  将培养皿置于冰上，轻轻晃动使其均匀覆盖，裂解15-30分钟。期间可用细胞刮将细胞刮下，或轻轻吹打，促进裂解。

4.  收集裂解物：  用移液器将细胞裂解混合物转移至预冷的1.5 mL离心管中。

5.  离心澄清：  在4℃，12,000 - 16,000 × g 条件下，离心15-20分钟。

6.  上清收集：  小心地将上清液（即含可溶性蛋白的裂解物）转移至新的预冷离心管中。避免吸到底部的细胞碎片和不溶物沉淀。

7.  蛋白定量与分析：  立即用BCA或Bradford法进行蛋白浓度测定，随后进行SDS-PAGE、Western Blot等实验，或分装冻存于-80℃。

注意事项  

1.  安全防护：  NP-40为化学试剂，操作时请穿戴实验服、手套和护目镜。若接触皮肤或眼睛，请立即用大量清水冲洗并就医。

2.  低温操作：  整个裂解过程务必在低温下进行，并快速操作，以有效抑制蛋白降解。

3.  抑制剂添加：  蛋白酶/磷酸酶抑制剂不稳定，尤其是PMSF在水溶液中半衰期短，必须在使用前新鲜添加。

4.  沉淀处理：  离心后的沉淀含有细胞核、骨架成分等，如需提取核蛋白，可保留沉淀进行后续操作。

5.  粘度控制：  裂解物中DNA含量过高可能导致粘稠，可酌情使用超声仪（短时、低功率）或核酸酶进行处理，以降低粘度。

6.  优化建议：  不同细胞系的裂解效率不同，初次使用建议进行条件优化（如裂解液用量、孵育时间）。  

常见问题解答  

Q1: 裂解后蛋白浓度过低怎么办？

A:  可能原因及对策：

       细胞数量不足：增加起始细胞量。

       裂解不充分：适当增加裂解液用量或延长冰上孵育时间，并配合吹打或涡旋。

       抑制剂影响：高浓度PMSF可能干扰某些蛋白定量方法，可设立对照验证。

       蛋白降解：确保裂解液已预冷，抑制剂新鲜添加，操作迅速。

Q2: Western Blot背景高或出现非特异性条带？

A:  可能原因：

       裂解物中核酸或脂质过多：增加离心速度和时间，或对裂解物进行超声处理。

       一抗/二抗特异性问题：优化抗体浓度和孵育条件。

       封闭不充分：尝试更换封闭剂（如BSA、脱脂奶粉）或延长封闭时间。

Q3: 裂解液可以用于组织样本吗？

A:  可以，但组织样本通常更致密。建议先将组织块在液氮中研磨成粉末，再加入裂解液进行裂解，裂解过程可能需要更剧烈的手段（如匀浆、超声）以确保充分破碎。

Q4: 本品与RIPA裂解液有何区别？

A:  本品（1% NP-40）比标准的RIPA裂解液（通常含有SDS、脱氧胆酸钠等更强去垢剂）更为温和。RIPA裂解更彻底，背景更干净，但可能破坏蛋白质间的弱相互作用。NP-40裂解液更适合用于研究蛋白质-蛋白质相互作用（如Co-IP），而RIPA更适用于总蛋白提取和难溶蛋白的提取。

Q5: 裂解产物可以储存多久？

A:  加入抑制剂的裂解产物在4℃可短期存放（数小时至一天）。为长期保存，建议分装后于-80℃冻存，避免反复冻融（推荐冻融次数≤3次）。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。