SDS裂解液，LK-6101

产品介绍  

SDS裂解液是一种基于十二烷基硫酸钠（SDS）的强效变性裂解缓冲液，专门用于从各类细胞和组织样本中高效提取总蛋白。SDS作为离子型去垢剂，通过破坏细胞膜结构和蛋白质疏水相互作用，同时使蛋白质充分变性、展开。本产品适用于需要蛋白质完全变性的下游分析，如SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、Western Blot等。其强效的裂解能力使其能够溶解大多数蛋白质，包括难溶的膜蛋白和细胞骨架蛋白。  

产品特点  

1. 强效裂解能力： 含有SDS，能高效裂解细胞膜、核膜及细胞器膜，释放总蛋白。

2. 蛋白质变性功能： 确保蛋白质完全变性展开，暴露出抗原表位，适合后续Western Blot检测。

3. 兼容下游应用： 提取的蛋白样品可直接用于SDS-PAGE、Western Blot，简化操作流程。

4. 稳定性高： 室温保存，无需特殊处理，使用方便。

5. 普适性强： 适用于多种细胞（贴壁、悬浮）和组织样本的蛋白提取。

使用方法（仅供参考）  

A. 细胞样本总蛋白提取（以6孔板为例）

1.  样本准备：

       吸弃培养基，用预冷的PBS轻柔洗涤细胞2次。

       吸净残留PBS，将培养板置于冰上。

2.  裂解：

       向每孔细胞中加入 100-200 μL 预热的SDS裂解液（建议预热至95°C以上）。

       立即用细胞刮刀快速刮取细胞，并将粘稠的裂解物转移至预热的1.5 mL离心管中。

3.  变性：

       将离心管置于 95-100°C 金属浴或沸水浴中，加热5-10分钟。

       期间可短暂涡旋振荡1-2次，以确保裂解充分和样本均一。

4.  冷却与分装：

       加热后，短暂离心收集管壁冷凝液。

       样品可直接用于电泳，或-20°C/-80°C分装冻存。

B. 组织样本总蛋白提取

1.  样本处理：

       取适量新鲜或冻存组织（建议10-30 mg），在液氮中或冰上快速研磨成粉末，或剪切成细小碎片。

       将组织粉末/碎片转移至预热的离心管中。

2.  裂解与变性：

       按每10 mg组织加入 100-200 μL 预热的SDS裂解液。

       立即 涡旋剧烈振荡，使组织充分分散。

       置于 95-100°C，加热10-15分钟，期间每3-5分钟涡旋振荡一次。

3.  澄清与收集：

       加热后，于室温或4°C，12,000-16,000 × g 离心10-15分钟。

       小心吸取上清液（即为总蛋白裂解物），转移至新管。沉淀为不溶性碎片，弃去。

       样品可直接用于电泳或冻存。

C. 还原处理（关键步骤）

- 还原剂添加： 在使用SDS裂解液的同时或加热前，务必加入还原剂以打开蛋白质的二硫键。

- 常用还原剂及终浓度：

    - β-巯基乙醇（β-ME）： 终浓度5% (v/v)

    - 二硫苏糖醇（DTT）： 终浓度50-100 mM

- 操作： 在裂解液中加入计算好体积的还原剂，混匀后再进行加热变性步骤。

D. 蛋白定量与上样

- 蛋白定量： 由于SDS会严重干扰Bradford法和BCA法的测定，不推荐直接用此裂解液提取的样本进行定量。若需定量，建议：

    1.  使用兼容去垢剂的定量试剂盒（如基于Lowry法的改良试剂盒）。

    2.  使用经验性上样量，如按细胞数量（每10^5个细胞上样10-20 μL裂解物）或组织重量估算。

- 电泳上样： 裂解物本身含有缓冲成分和指示剂，加热后可直接或适当稀释后上样进行SDS-PAGE。  

注意事项  

1.  高温操作与防护： SDS裂解液需高温加热，操作时务必佩戴防热手套和护目镜，防止烫伤。加热时确保管盖紧闭，防止爆开。

2.  还原剂的重要性： 未添加还原剂的SDS裂解液不能完全打开蛋白质的二硫键，可能导致蛋白质聚集、迁移异常或Western Blot信号弱。务必按要求添加。

3.  避免反复冻融： 提取的蛋白样品建议分装冻存，避免反复冻融超过3次，以免蛋白降解或沉淀。

4.  样品粘稠度： 裂解物可能因DNA释放而非常粘稠。可通过以下方法处理：

    - 使用更细的枪头或剪掉枪头前端。

    - 用超声仪在冰上对样品进行短暂、低功率的超声处理（注意避免产热）。

    - 加热后通过26G针头反复抽吸剪切。

5.  不适用于非变性分析： 本裂解液为强变性条件，提取的蛋白质已失去天然构象和活性，不能用于免疫共沉淀（Co-IP）、染色质免疫沉淀（ChIP）、酶活测定等需要保持蛋白质天然状态或相互作用的实验。

6.  个人安全： SDS粉尘和溶液对眼睛、皮肤和呼吸道有刺激性。β-巯基乙醇有恶臭且有毒。操作时需在通风橱内进行，并穿戴实验服、手套和护目镜。  

常见问题解答  

Q1：为什么提取的蛋白样品在加热后变得非常粘稠，甚至呈凝胶状？

A1： 这通常是由于高温裂解释放出大量基因组DNA所致。解决方法：1) 将样品通过注射器针头（如26G）反复抽吸几次以剪切DNA；2) 加入适量核酸酶（如Benzonase，按说明书添加）并在37°C孵育15-30分钟后再加热；3) 对样品进行短暂超声破碎（冰上操作）。

Q2：可以用Bradford或BCA法对提取的样品进行蛋白定量吗？

A2：不推荐。 高浓度的SDS会严重干扰Bradford和BCA法的显色反应，导致定量极不准确。如需精确定量，请使用专门兼容高浓度去垢剂的蛋白定量试剂盒（如基于Lowry法或2-D Quant Kit），或采用经验性上样量。

Q3：SDS裂解液与RIPA裂解液、NP-40裂解液有何区别？如何选择？

A3：

- SDS裂解液（本品）： 最强效，完全变性，适用于SDS-PAGE/WB，能提取膜蛋白、难溶蛋白，但破坏所有蛋白天然结构和相互作用。

- RIPA裂解液： 较强效（含多种去垢剂），部分变性，适用于大多数WB，也能用于部分IP（需验证），背景可能较脏。

- NP-40裂解液： 最温和，非变性，适用于Co-IP、ChIP、酶活测定等需要保持蛋白活性和互作的实验。

- 选择依据： 仅做Western Blot检测总蛋白表达，尤其是针对难溶蛋白时，优选SDS裂解液；若需研究蛋白相互作用或功能，则选择更温和的裂解液。

Q4：加热后样品出现白色沉淀，会影响结果吗？

A4： 少量沉淀可能是SDS在低温下析出（加热后会溶解）或部分不溶性物质。如果沉淀较多，建议在加热变性后、上样前，于室温下高速离心（≥12,000 × g，10分钟），取上清进行电泳。

Q5：裂解液可以用于提取细菌或酵母的蛋白吗？

A5：可以，但需更强力的破壁步骤。 对于细菌/酵母，需先通过酶解法、机械研磨（如玻璃珠振荡）或反复冻融等方法破坏细胞壁后，再加入预热好的SDS裂解液，并立即进行加热步骤，否则裂解效率会很低。

Q6：产品中的溴酚蓝有何作用？

A6： 溴酚蓝是电泳指示剂。在SDS-PAGE中，它随电泳前沿迁移，当其迁移至凝胶底部时，提示电泳可结束。其存在便于用户观察上样和电泳进程。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。