增强型磷酸酶抑制剂混合物,100X，LK-6375

产品介绍  

本品是一种高效、广谱的100X浓缩型磷酸酶抑制剂混合物，专为在细胞/组织裂解、蛋白提取与纯化过程中保护蛋白质磷酸化状态而设计。本混合物通过精选的8种抑制剂，协同作用于丝氨酸/苏氨酸磷酸酶（Serine/Threonine Phosphatase）、酪氨酸磷酸酶（Tyrosine Phosphatase）、酸性磷酸酶（Acid Phosphatase）及碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase）等多个关键靶点，实现对细胞内广泛存在的磷酸酶活性的强力抑制。它能最大限度地减少蛋白质样品的去磷酸化，确保磷酸化蛋白的稳定性和后续检测（如Western Blot、磷酸化抗体芯片、激酶活性测定等）结果的准确性与可靠性。

关键成分：Cantharidin、Bromotetramisole、Microcystin LR、Sodium orthovanadate、Sodium molybdate、Sodium tartrate、Imidazole、Sodium Fluoride。

产品形式：混合物以双组分形式提供，分别优化溶解于DMSO（含Cantharidin、Bromotetramisole、Microcystin LR）和水溶液（含其余成分），确保各成分的最佳稳定性和活性。  

产品特点  

1.  全面广谱的抑制作用：独特组合8种高效抑制剂，覆盖范围远超常规仅含3-4种抑制剂的同类产品，提供对PP1、PP2A、PP2B、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、酪氨酸磷酸酶等多种磷酸酶家族的强力抑制。

2.  高效协同配方：针对不同磷酸酶的抑制机理（如竞争性抑制、不可逆结合、金属离子螯合等）进行科学配比，各组分协同增效，在低浓度下即可实现高效抑制。

3.  优化的溶解体系：关键脂溶性抑制剂（如Microcystin LR）溶于DMSO，水溶性成分溶于水，避免了单一溶剂可能导致的沉淀或失活问题，确保各组分在添加到裂解液时能迅速、均匀分散。

4.  使用便捷：100X浓缩液设计，使用时只需按1:100比例稀释，即可获得1X工作液浓度，操作简单，节省时间。

5.  兼容性广：经验证，本产品与多种常规细胞/组织裂解液（如RIPA、NP-40、Triton X-100等）兼容，且不影响大多数下游蛋白分析实验。

使用方法（仅供参考）  

重要提示：以下为通用参考方案，最佳使用条件需根据具体实验样本和裂解液体系进行优化。

1.  工作液制备：

       在预冷的裂解缓冲液中，按 1:100 的体积比 加入本品。例如，准备1 mL裂解工作液，需加入10 μL的本抑制剂混合物。

       添加顺序：建议先将所有裂解液成分（如Tris-HCl、NaCl、去垢剂等）混合好并预冷，在使用前即刻加入本品，轻轻涡旋或颠倒混匀，切勿剧烈震荡产生泡沫。

       配制好的含有抑制剂的裂解工作液建议置于冰上，并在当天使用，以保证最佳效果。

2.  样本裂解：

       对于细胞样本：吸弃培养液，用预冷的PBS轻轻洗涤细胞。每10^6个细胞加入100-200 μL含抑制剂的裂解工作液，冰上裂解15-30分钟，期间可轻柔晃动。随后，4°C，12,000-14,000 g离心10-15分钟，取上清即为总蛋白样品。

       对于组织样本：将组织块剪碎，加入适量含抑制剂的裂解工作液，用匀浆器进行机械匀浆。冰上裂解30-60分钟后，同上离心取上清。

       裂解过程全程保持低温（冰上操作）。

3.  下游应用：

       获得的蛋白样品可立即用于BCA/Bradford法定量，随后进行SDS-PAGE、Western Blot、免疫共沉淀（Co-IP）等实验。

       如需长期保存，建议将蛋白样品分装后于 -80°C 冻存，并避免反复冻融。

注意事项  

1.  安全警告：本品所含的 Microcystin LR、Cantharidin 为剧毒物质。操作时必须穿戴实验服、手套和防护眼镜，在通风橱内进行，避免吸入、接触皮肤或吞食。废弃物应按有毒有害化学品处理规定处置。

2.  储存与稳定性：本品应始终保存于 -20°C，并避光。解冻后请短暂离心使液体聚集于管底。为获得最佳效果，建议将产品分装成小份使用，避免反复冻融（冻融次数建议不超过3次）。

3.  使用注意：

       本品为100X浓缩液，不可直接添加到样品中，必须先稀释于裂解缓冲液。

       加入抑制剂后，裂解液的pH值可能会发生轻微变化，若实验对pH极其敏感，建议检查并调整pH。

       Sodium orthovanadate 是酪氨酸磷酸酶的有效抑制剂，其在水中会缓慢氧化，制备裂解工作液时新鲜加入本品可保证其还原态活性。

       本产品旨在抑制磷酸酶，对于激酶活性无保护作用。若需同时维持激酶活性，请结合使用相应的蛋白酶抑制剂和/或激酶保护剂。

4.  兼容性：本品与大多数蛋白酶抑制剂混合物兼容，可联合使用以获得更全面的蛋白保护效果。  

常见问题解答  

Q1: 本品能完全抑制所有磷酸酶活性吗？

A: 虽然本混合物配方广谱且高效，但由于生物样本中磷酸酶的种类、含量和存在形式复杂多样，理论上无法保证100%抑制所有磷酸酶活性。但它能显著降低去磷酸化水平，满足绝大多数研究需求。

Q2: 使用本品会影响蛋白浓度测定吗？

A: 在推荐的使用浓度下，本品对BCA法或Bradford法蛋白定量通常没有显著干扰。但仍建议使用含有相同浓度抑制剂的裂解液作为空白对照进行校准。

Q3: 本品可以用于磷酸化流式细胞术或免疫荧光吗？

A: 可以。本品同样适用于在细胞固定前或固定破膜过程中保护细胞内磷酸化信号。使用时，请将本品按比例加入到相应的固定液或破膜缓冲液中。具体浓度可能需要优化。

Q4: 为什么产品要分成DMSO溶液和水溶液两部分？

A: 这是为了确保每种抑制剂都能以最佳状态溶解和稳定存在。Microcystin LR等成分在DMSO中更稳定且溶解度高，而氟化物、钼酸盐等在水中更稳定。双组分设计保证了产品在储存和使用时各成分的活性。

Q5: 本品与其他公司同类产品如何换算使用量？

A: 本品是100X浓缩液，通常与其他品牌的100X磷酸酶抑制剂混合物使用比例相同（即1:100稀释）。但由于配方差异，针对特别关键的实验，建议进行对比测试以确定最优条件。

Q6: 裂解后样品可以存放多久？

A: 含有抑制剂的裂解样品在4°C可短期放置数小时。对于长期保存，强烈建议分装后于-80°C冻存，并尽快进行下游实验，以防抑制剂降解或蛋白修饰。  

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。