脂肪酸氧化（FAO）检测试剂盒（微量法），LK-3617

产品简介

脂肪酸氧化（FAO）是体内脂肪酸分解的主要途径，FAO 可以供应机体所需要的大量能量。FAO 也是脂肪酸的 改造过程，机体所需要的脂肪酸链的长短不同，通过氧化可将长链脂肪酸改造成长度适宜的脂肪酸，供机体 代谢所需。本试剂盒可检测生物样本样本的 FAO 能力，其原理是 FAO 过程消耗底物和 NAD+，生成 NADH 在电 子偶联剂存在下将 WST-8 还原生成橙黄色的 formazan（甲臜），在 450nm 左右有最大吸收峰。通过检测体系 450nm 处光吸收增加速率可反映出样本的 FAO 能力。

注意事项:

1. 离心机务必使用水平离心机，并设置合适的参数，避免因操作不当影响实验结果。

2. 本产品为无菌产品，请穿实验服并佩戴一次性手套，注意无菌操作，避免微生物污染。

3. 使用前需确保试剂完全融化并混匀。

自备材料：

1.酶标仪或可见分光光度计（能测 450nm 处的吸光度）及恒温培养箱

2.96 孔板或微量玻璃比色皿、移液枪及枪头

3.去离子水

4.匀浆器（如果是组织样本）

使用方法：

样本制备

1. 组织：称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，10,000g，4℃离心 10min，取上清液置冰上待测。

2. 细胞：收集 500 万细胞到离心管内，用冷 PBS 清洗细胞，离心后弃上清，加入 1mL 提取液，冰浴超声波破

碎细胞 5min（功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 7s，重复 30 次），然后 10,000g，4℃离心 10min，取上清液，

置冰上待测。

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1 个月。测定蛋白浓度，推荐使用 BCA

法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。 

实验步骤

1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长到 450nm，可见分光光度计去离子水调零。

2. 操作表（下述操作在 96 孔板或微量玻璃比色皿中操作）：

混匀后立刻测定测定 450nm 处吸光度 A1，37℃避光孵育 20min 后，测定 450nm 处吸光度 A2。计算ΔA 标=A 标 2-A

空 2

；ΔA 测=A 测 2-A 测 1（空白和标准曲线只需做 1 次）。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测小于 0.001 可适当加大样本量。如

果ΔA 测大于 1.0，样本可用提取液进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

结果计算 

1. 标准曲线的绘制

以标准液浓度为 y 轴，ΔA 标为 x 轴，绘制标准曲线（浓度为 y 轴更方便计算结果）。将ΔA 测带入方程得到 y

值（1mM=1µmol/mL）即 NADH 含量。

2. FAO 能力计算

（1）按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1µmol 的 NADH 定义为一个 FAO 能力单位。

FAO 能力（µmol/min/mg prot）＝y×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T×n =0.5y÷Cpr×n

（2）按样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟生成 1µmol 的 NADH 定义为一个 FAO 能力单位。

FAO 能力（µmol/min/kg 鲜重）＝y×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T×n =0.5y÷W×n 

（3）按细胞数量计算

单位的定义：每 1 万个细胞在反应体系中每分钟生成 1µmol 的 NADH 定义为一个 FAO 能力单位。

FAO 能力（µmol/min/10 4 cell）=y×V 反总÷（V 样÷V 样总×500）÷T×n=0.001y×n

V 反总：反应体系总体积，0.2mL；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白

质浓度，mg/mL；T：反应时间，20min；n：样本稀释倍数；W：样品质量，g；500：细胞总数，500 万。

结果展示

典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。