人Ficolin-2检测试剂盒（ELISA），E102220

产品简介

人 Ficolin-2 ELISA Kit 是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（EnzymeLinked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。预先包被的抗体和检测相抗体都是近100%纯度的亲和纯化多克隆抗体。检测相抗体经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS 或 TBS 洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS 的彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 Ficolin-2 呈正相关

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人FABP2的含量，本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断。

产品保存

l有效期：6个月，保存条件：2-8℃。

样本处理

样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。细胞培养上清——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。血清——用干净试管收集血液，室温凝固 2 小时，离心 1000×g 15 分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。血浆——用干净试管收集，肝素抗凝血液，30 分钟内离心，1000×g 15 分钟，收集血浆。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。细胞裂解液——对于贴壁细胞，去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常 10 秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打把细胞吹散，用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后，10000—14000g 离心3-5分钟，取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存

需要而未提供的试剂和器材

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

试剂盒组分

注意事项

1. 使用前 TMB 显色液应为无色透明溶液，若发现颜色异常，请及时与厂家联系。

2. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

3.  要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。

4． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

5． 禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。

6． 本公司提供的 96 孔酶标板是单条可拆型酶标板，用户可按需求使用

7． 揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。

1． 试剂准备

A. Ficolin-2 标准品的稀释和使用：在使用前 2 小时内准备。试剂盒提供 2 管标准品，每管 50ng，每次使用 1 管。

1． 配制 50ng/ml 标准品：取 1ml 样品稀释液加入标准品管内，盖好后静置10 分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解。

2． 配制 25ng/ml→780pg/ml 标准品：准备 6 只 Eppendorf 管，每管加0.3ml 样品稀释液，分别标记上 25ng/ml，12.5ng/ml，6.25ng/ml，3.12ng/ml，1.56ng/ml，0.78ng/ml。取0.3ml50ng/ml 的标准品加入标记 25ng/ml 的管中，混匀后同样取出 0.3ml , 加入下一只管中。余同此类推，直到最后一只样品管。注意：已经稀释的标准品（50,000pg/ml），应在 12 小时内使用。-20℃冷冻保存条件下，2 天内可以使用,但不得反复冻融。

B. 生物素标记抗人 Ficolin-2 抗体工作液的准备：在使用前 2 小时内准备。1． 根据每孔需要 100ul 计算总的用量（实际配制时应多配制 100-200ul）。2． 按 1ul 生物素标记抗人 Ficolin-2 加抗体稀释液 99ul 的比例配制工作液。轻轻混匀。

C. 亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前 1 小时内准备。1． 根据每孔需要 100ul 计算总的用量（实配时应多配制 100-200ul）。

2． 按 1ul 亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加 ABC 稀释液 99ul 的比例配制工作液。轻轻混匀。

A. 操作步骤

1． 加样品和标准品，37℃反应 90 分钟。不洗。

2． 加生物素标记抗体，37℃反应 60 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 3 次。

3． 加 ABC，37℃反应 30 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 5 次。

4． TMB37℃反应 20-25 分钟。5． 加入终止液，读数。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

试剂盒性能

1.  检测范围：以产品附带说明书为准。

2.  灵敏度：以产品附带说明书为准。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

特别说明

由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。

1. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。

2. 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。

3. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。

4. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

5. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。

6. 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。

7. 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。