B27细胞添加剂，LK-1608

产品介绍  

B27细胞添加剂是一种高度优化的、限定化学成分的、无血清细胞培养基添加剂，专为支持中枢神经系统（CNS）及外周神经系统（PNS）来源的神经元细胞（如胚胎海马神经元、皮层神经元、多巴胺能神经元）以及多种干细胞来源的神经元（如iPSC/ESC诱导分化的神经细胞）的生长、分化与长期存活而设计。

本产品基于经典的B27配方改良，包含了必需氨基酸、维生素、抗氧化剂（如维生素E、超氧化物歧化酶）、激素（如胰岛素、转铁蛋白）以及脂肪酸等关键组分，能够有效维持神经元的高活性，促进轴突和树突的快速生长，并保持神经网络的电生理活性。

产品特点  

1.  无血清系统： 无需添加胎牛血清（FBS），即可实现神经元的长期培养（>7天），避免了血清中不确定成分对神经分化的干扰。

2.  高纯度与一致性： 化学成分限定，不含任何动物源成分（部分配方根据需求可能含微量动物源，请以具体质检单为准），批间差极小。

3.  支持多种神经元： 适用于原代神经元、神经干细胞定向分化、以及类器官（Organoid）的培养。

4.  促进成熟： 富含抗氧化剂和神经营养因子，显著提高神经元突触发生（Synaptogenesis）和髓鞘形成效率。

使用方法（仅供参考）  

注意： 以下操作均需在无菌条件下进行。

 1. 解冻与分装

   收到产品后，若需长期保存，请立即置于-20℃。

   首次使用时，建议在 2-8℃ 冰箱内缓慢解冻（切勿在37℃水浴中反复加热解冻，以防蛋白聚集或组分失活）。

   解冻后，轻轻颠倒混匀，按单次用量（如1ml）分装至无菌冻存管中，立即放回-20℃保存。避免反复冻融。

 2. 基础培养基配制

B27添加剂通常与 Neurobasal培养基 配合使用，以维持神经元的最佳状态。

   配制完全培养基（完全培养基可在2-8℃避光保存2周）：

       Neurobasal 培养基： 98 ml

       B27 添加剂 (50×)： 2 ml

       L-谷氨酰胺（或 GlutaMAX™）： 1 ml (终浓度 0.5-2 mM，根据实验需求调整)

       （可选）青霉素-链霉素双抗： 1 ml

 3. 神经元培养示例（以原代海马神经元为例）

1.  包被： 使用多聚赖氨酸（PLL）或层粘连蛋白（Laminin）包被培养皿/板过夜，使用前用无菌PBS清洗2-3遍。

2.  种板： 分离原代神经元，使用上述配制好的完全培养基重悬细胞，按照实验所需密度接种。

3.  培养：

       接种后第1-3天： 避免移动培养皿，以利于细胞贴壁。

       半量换液： 每3-4天进行一次半量换液。将旧的完全培养基收集，离心去除细胞碎片，与新鲜预热的完全培养基按1:1混合后加回原孔，以保留神经元分泌的内源性营养因子。

       长期培养： 在B27添加剂的支持下，神经元可持续培养至14-21天，适用于免疫荧光、电生理或钙成像实验。

注意事项  

1.  避光操作： B27中含有维生素A、维生素E等光敏成分，操作和培养过程中请尽量避免长时间暴露于强光下。

2.  避免过度加热： 解冻或预热培养基时，请勿将添加剂直接置于高温水浴中。建议将完全培养基置于37℃水浴中预热不超过30分钟。

3.  沉淀物： 解冻后若发现轻微絮状沉淀（主要为脂蛋白复合物），可于4℃下短暂离心（3000 rpm， 5分钟），取上清使用。若沉淀严重（如因反复冻融导致），请停止使用。

4.  适用性： 虽然B27支持大多数神经元存活，但对于特定类型的神经胶质细胞（如星形胶质细胞）的支持效果有限。若需高比例的胶质细胞共培养，请考虑添加其他因子或使用血清系统。

5.  质量控制： 本产品经过无菌测试、内毒素检测（<0.5 EU/ml）及细胞功能测试（原代神经元存活率 > 80%）。  

常见问题解答  

Q1： B27添加剂可以用于干细胞（iPSC/ESC）的神经诱导吗？

A： 可以。在神经诱导分化的后期（即神经元定向分化和成熟阶段），B27是首选的无血清添加剂。但在早期的神经上皮诱导阶段，通常推荐使用N2添加剂；待细胞进入神经元谱系后，再换用B27或B27与N2的混合体系。

Q2： B27和N2添加剂有什么区别？

A： N2是较基础的无血清添加剂，成分相对简单（主要含胰岛素、转铁蛋白等），适合支持神经前体细胞的增殖和早期分化。B27成分更为复杂和丰富（含抗氧化剂、激素、脂肪酸等），更适合成熟神经元的长期培养、突触形成和功能维持。

Q3： 完全培养基（含B27）能保存多久？

A： 由于B27中含有丰富的抗氧化剂和维生素，完全培养基在2-8℃避光保存通常建议在 2周内 使用完毕。如果发现培养基颜色变为紫色（pH升高）或出现浑浊，请立即丢弃。

Q4： 使用B27培养神经元时，细胞出现聚团或漂浮怎么办？

A：

1.  细胞聚团： 可能原因是细胞接种密度过高，或者包被基质不均匀。建议优化包被流程，或接种后轻柔摇匀。

2.  漂浮死亡： 检查是否进行了“半量换液”。全量换液会去除神经元自分泌的神经营养因子，导致细胞凋亡。建议严格遵循半量换液法。

Q5： B27添加剂可以用于其他细胞系（如肿瘤细胞）的培养吗？

A： B27是专门为终末分化的神经元设计的配方。用于肿瘤细胞（如Neuro-2a）或普通贴壁细胞可能会导致生长速度变慢，因为这些细胞不需要如此复杂的抗氧化保护机制。建议针对特定细胞系选择专用培养基。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。