原代细胞传代消化液 ，LK-1368

产品介绍  

本产品专为原代细胞的传代培养设计，是一种温和的、不含胰蛋白酶的替代型消化试剂。与传统的胰酶-EDTA相比，本产品作用更温和，能有效减少消化过度对原代细胞造成的损伤，提高细胞活率和贴壁效率，尤其适用于消化耐受性强或对胰酶敏感的原代细胞。

核心成分： 天然蛋白酶复合物、胶原酶、BSA、HEPES、酚红（可选）。

产品特点  

1. 温和高效： 专为脆弱的原代细胞优化，在有效解离细胞的同时，最大限度保护细胞表面蛋白和抗原表位。

2. 无需中和： 多数情况下，加入含血清培养基或等体积的胰酶抑制剂即可终止消化，操作简便。

3. 无动物源成分（可选）： 适用于需要减少异源污染或进行特定研究的实验。

4. 即用型： 无菌过滤的即用型液体，无需稀释或配制。  

使用方法（仅供参考）  

适用细胞： 贴壁生长的原代细胞（P0-P5代以内效果最佳）。

所需材料： 无菌PBS、完全培养基、培养皿/瓶、离心管、37℃水浴锅、离心机。

操作步骤：

1. 预热： 将消化液、PBS、完全培养基提前置于37℃水浴锅中预热15-20分钟。

2. 清洗： 吸去旧培养基，用无菌PBS轻轻冲洗细胞表面1-2次，去除残留血清。

3. 覆盖： 加入适量消化液（例如T25瓶加2-3 mL，T75瓶加4-5 mL），轻轻晃动，确保液体完全覆盖细胞层。

4. 消化： 将培养瓶置于37℃培养箱中消化。关键步骤：每隔2-3分钟在显微镜下观察细胞形态变化。当细胞变圆、细胞间隙扩大、部分细胞开始脱落时（通常需要3-10分钟，不同类型细胞差异较大），即可终止消化。

5. 终止： 加入等量或2倍体积的含血清完全培养基（或胰酶抑制剂）终止消化。轻轻吹打培养瓶底部2-3次，使细胞完全脱落。

6. 收集： 将细胞悬液转移至离心管中，200-300×g 离心3-5分钟。

7. 重悬： 弃上清，加入新鲜完全培养基重悬细胞，按1:2或1:3的比例接种到新的培养瓶中。

注意事项  

1. 细胞特异性： 不同来源的原代细胞对消化酶的敏感性差异极大。首次使用时，强烈建议进行预实验，确定最佳消化时间和终止方法。

2. 避免过度消化： 消化过度会导致细胞膜损伤，表现为细胞活力下降、贴壁率低。宁可消化不足（可通过轻轻吹打弥补），不可消化过度。

3. 使用无菌操作： 请在生物安全柜中进行所有操作，避免污染。

4. 不可反复冻融： 产品长期储存需在2-8℃，不可冷冻。分装后请一次性使用完毕。

5. 健康安全： 如皮肤或眼睛不慎接触，请立即用大量清水冲洗。

常见问题解答  

1. 细胞消化不下来，怎么办？

- 可能原因： 细胞密度过高或生长过老；消化时间不足；该细胞类型对该酶不敏感。

- 推荐解决方案： 在细胞融合度80%-90%时进行传代；适当延长消化时间（最多不超过20分钟）；换用含更高浓度胶原酶的专用消化液。

2. 消化后细胞活力低，是什么原因？

- 可能原因： 消化过度；终止时吹打过猛；离心转速过高。

- 推荐解决方案： 缩短消化时间，提前观察；使用巴氏吸管轻柔吹打；降低离心力至150-200×g。

3. 传代后细胞贴壁率低，如何解决？

- 可能原因： 消化过程中细胞膜受损；细胞悬液中有残留消化液。

- 推荐解决方案： 确保充分终止（用含血清培养基或抑制剂）；离心后彻底吸干上清；使用包被过的培养瓶（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。

4. 消化后细胞成团，怎么处理？

- 可能原因： 细胞间连接紧密（如上皮细胞）；吹打不充分；存在残留DNA。

- 推荐解决方案： 加入少量DNase I (25 μg/mL) 处理；增加温和吹打次数；使用细胞过滤器（40 μm滤网）过滤。  

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。