乙酰胆碱ACH(Acetylcholine)检测试剂盒,E903008

实验原理

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中乙酰胆碱ACH(Acetylcholine)水平。用纯化的乙酰胆碱ACH(Acetylcholine)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入乙酰胆碱ACH(Acetylcholine)，和 HRP 标记的乙酰胆碱ACH(Acetylcholine)抗原，使它们竞争结合，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 样本颜色的深浅和样品中的乙酰胆碱ACH(Acetylcholine)的含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长 下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中乙酰胆碱ACH(Acetylcholine)的含量。

用途

本试剂盒用于测定样本中乙酰胆碱ACH(Acetylcholine)的含量。

检测范围：16-1000pg/mL

规格：48/96Tests

保存条件及有效期

试剂盒保存：；2-8℃,有效期：6 个月;-20℃,有效期：12 个月。

试剂盒组成

标本要求

1 ．标本处理：（1）水样   采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查

（2）组织   样品用丁醇： 甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相 关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验， 可将标本放于-20℃保存，备查

2．不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.     加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、 待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl， 然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2.     加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

3.     温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。

4.     配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.     洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.     显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

7.     终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

8.     测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 1 小时后方可使用，酶标包被板开封后如未用完， 板条应装入密封袋中保存。

2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4 ． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数 ( ×n×5）。

5 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6 ．底物请避光保存。

7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9 ．本试剂不同批号组分不得混用。
特别说明

由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。

1. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。

2. 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。

3. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。

4. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

5. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。

6. 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。

7. 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。