0.45μm PVDF 转印膜说明书（Western Blot 专用），LK-6387

产品介绍  

本产品为聚偏二氟乙烯（Polyvinylidene Fluoride, PVDF）印迹膜，采用进口原料制成。PVDF 膜是 Western Blot 实验中最常用的高结合力载体。0.45μm 是 Western Blot 实验的标准孔径选择。

该孔径在保证对蛋白质高吸附容量的同时，提供了较低的液体流动阻力，非常适合大多数常规分子量蛋白（>20 kDa）的湿转或半干转印。与 0.2μm 孔径膜相比，0.45μm 膜在转膜效率上更具优势，且背景控制出色。  

产品特点  

1. 标准孔径： 0.45μm 孔径，专为 >20 kDa 蛋白设计，平衡了结合力与转膜效率，是实验室常规 WB 的首选耗材。

2. 高结合载量： 蛋白吸附能力强，背景低，信噪比高。

3. 极强的耐用性： 机械强度极高，耐受多次抗体剥离（Stripping）与重新杂交，不易破损。

4. 广泛兼容性：

   · 染色兼容： 支持丽春红（可逆）、考马斯亮蓝（不可逆）等多种染色。

   · 检测兼容： 适用于化学发光（ECL）、显色法及同位素检测。

使用方法（仅供参考）  

重要提示： PVDF 膜具有强疏水性，使用前必须进行活化预处理。

1. 膜的活化：

   · 裁剪所需大小的膜，置于 100% 甲醇 中浸泡 15-30 秒（膜变为半透明灰色）。

   · 立即转入预冷的 转膜缓冲液 中平衡至少 5 分钟，备用。切勿让膜在活化后干燥。

2. 转膜（湿转法参考）：

   · 按照“阴极（黑）-海绵-滤纸-凝胶-PVDF膜-滤纸-海绵-阳极（红）”组装夹层。

   · 转膜条件建议（针对 0.45μm 孔径）： 通常采用 200-300mA 恒流转印。对于 30-100 kDa 蛋白，0.45μm 膜的转膜效率往往优于 0.2μm 膜。

3. 免疫检测：

   · 转膜完成后，立即用 5% 脱脂牛奶（TBST 配制）室温封闭 1 小时。

   · 按标准流程孵育一抗、二抗，并进行 ECL 化学发光成像。

注意事项  

1. 蛋白分子量限制： 请勿使用本产品转印 < 20 kDa 的小分子量蛋白。由于孔径较大，小蛋白极易穿透膜进入滤纸，导致信号微弱或无信号。小蛋白请选用 0.2μm 孔径膜（货号 LK-6389）。

2. 防污染： 全程佩戴无粉手套，仅用平头镊子夹取膜边缘。指纹污染会导致化学发光时产生无法擦除的高背景黑点。

3. 保存状态： 未使用的膜请密封室温保存，避免受潮或接触有机溶剂。

常见问题解答  

Q1：0.45μm 和 0.2μm 的 PVDF 膜该如何选择？

A1：

· 选 0.45μm（本产品）： 目的蛋白分子量 > 20 kDa。这是实验室最通用的规格，转膜快，背景干净。

· 选 0.2μm（货号 LK-6389）： 目的蛋白分子量 < 20 kDa。孔径更小，能防止小分子蛋白穿透膜。

Q2：转膜后发现高背景或有脏污斑点？

A2：通常由以下原因引起：1. 用手触摸了膜表面；2. 封闭液牛奶未完全溶解（建议离心或过滤后使用）；3. 孵育抗体时膜局部干燥。

Q3：膜在转膜液中漂浮不浸润怎么办？

A3：这是甲醇活化不完全的表现。请确保将膜完全浸没在 100% 甲醇 中，待膜瞬间变透明后再放入转膜液。若放入转膜液后膜表面有水珠状疏水斑块，请重新用甲醇激活。  

产品声明
1. 用途限制： 本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断、治疗、食品、药品或存放于普通住宅内。

2. 实验风险告知： 由于科研实验本身具有探索性、未知性和多变量特性，若实验涉及珍贵样本，请务必自行开展小规模预实验，确认本产品效果满足实验要求后，再应用于大批量关键实验。

3. 售后范围： 本产品售后服务仅限产品本身质量问题，对于因使用本产品造成的任何间接损失、样本损耗或数据偏差，本公司不承担任何连带责任。购买即视为同意此条款。

4. 安全操作： 为了您的安全与健康，操作时请穿实验服并佩戴一次性手套。