非变性蛋白Marker（66-669kDa），LK-6365

产品背景介绍

本产品为即用型非变性蛋白分子量标准（Native Protein Marker），由4种高纯度天然蛋白质混合而成，分子量范围覆盖66kDa至669kDa。产品经优化配方处理，可直接上样于非变性聚丙烯酰胺凝胶（Native-PAGE），无需煮沸、无需加入还原剂或额外样品缓冲液，使用前仅需融化混匀即可。

非变性电泳（Native-PAGE）是在不破坏蛋白质天然构象的前提下进行分离的电泳技术，蛋白质的迁移率取决于其分子量、电荷密度及分子形状。本产品专为此体系设计，经考马斯亮蓝染色后呈现分布均匀、密度相近的清晰条带，可用于目的蛋白在非变性条件下的分子量估算、蛋白质复合物分析及酶活性检测等实验。需特别说明，本产品不适用于变性蛋白电泳（SDS-PAGE），因SDS存在下多亚基蛋白将发生解聚，导致条带位置异常。

产品特点

1. 即开即用：产品已预混于非变性上样缓冲液中，融化后直接上样，操作便捷。

2. 高分子量覆盖：覆盖66-669kDa范围，特别适合大分子量蛋白及蛋白复合物的分子量参照。

3. 条带清晰均一：各条带蛋白含量经优化配比，考马斯亮蓝染色后显色强度均匀，便于比对。

4. 稳定性好：-20℃保存有效期12个月，反复冻融耐受性好。

5. 兼容性强：适用于常规Tris-Gly非变性凝胶体系及多种非变性电泳缓冲体系。

保存条件：-20℃避光保存。建议首次使用后按单次用量（5-10μL）分装，避免反复冻融。未开封产品有效期12个月。

产品使用方法（仅供参考）

重要提示：使用前将产品从-20℃取出，室温或冰上融化后轻柔颠倒混匀，使沉淀充分溶解。切勿煮沸或高温加热。

一、非变性凝胶电泳

1. 按实验所需浓度制备非变性聚丙烯酰胺凝胶。推荐使用Tris-Gly体系，分离胶浓度6-10%，浓缩胶浓度4%。

2. 组装电泳装置，加入1×非变性电泳缓冲液（推荐Tris-Gly缓冲液，pH 8.3）。

3. 吸取3-5μL本产品加入上样孔。上样量可根据加样孔尺寸调整，0.75mm×5mm（厚度×宽度）加样孔推荐上样5μL，其他规格请适当增减。

4. 恒压电泳，推荐条件：浓缩胶80-100V，分离胶120-150V，电泳至溴酚蓝前沿距凝胶底部约25px处停止。

二、染色与显影

1. 电泳结束后取出凝胶，用考马斯亮蓝染色液室温染色1-2小时。

2. 用脱色液脱色至背景清晰、条带分明。

3. 凝胶成像系统拍照记录。若使用银染法，灵敏度远高于考马斯亮蓝，建议将Marker上样量稀释50倍后使用，避免信号过饱和。

三、分子量估算参考

1. 本产品各条带参考分子量如下：

   条带1：甲状腺球蛋白（Thyroglobulin）—— 669kDa

   条带2：铁蛋白（Ferritin）—— 440kDa

   条带3：过氧化氢酶（Catalase）—— 232kDa（部分配方为蜂蛋白MRJP1 238kDa）

   条带4：牛血清白蛋白（Albumin）—— 66kDa

2. 注：不同配方产品条带数可能为4-5条，请以实际产品批次说明为准。

产品使用注意事项

1. 严禁变性电泳使用：本产品专为Native-PAGE设计，不可用于SDS-PAGE。SDS会破坏蛋白质天然构象，使多亚基蛋白解聚，导致条带位置与标称值严重偏离。

2. 切勿加热处理：使用前仅需融化混匀，严禁煮沸或高温加热，否则将导致蛋白变性失活。

3. 防止蛋白酶降解：每次吸取请使用灭菌枪头或干净针头，用后立即盖紧管盖，避免引入蛋白酶致使产品降解。

4. 建议分装保存：首次使用后建议按5-10μL/管分装冻存，单次取用即弃，避免反复冻融影响条带清晰度。

5. 分子量估算需谨慎：非变性电泳中蛋白迁移率受分子量、电荷及分子形状共同影响，单一凝胶浓度下使用本产品不能精确测定目的蛋白绝对分子量。精确测定需在不同凝胶浓度下测定Rf值并绘制曲线推算。

6. 推荐电泳体系：推荐使用Tris-Gly缓冲体系（pH 8.3-8.8），8%分离胶浓度下各条带间距较为理想。其他缓冲体系或凝胶浓度可能导致部分条带迁移位置偏移。

常见问题解答（FAQ）

Q1：使用本产品进行电泳，条带模糊或拖尾怎么办？

A1：请排查以下原因：（1）上样前未充分混匀，建议融化后轻柔颠倒混匀5-10次；（2）产品反复冻融次数过多导致部分蛋白降解，建议更换新分装管；（3）电泳缓冲液pH值偏离推荐范围，建议更换新鲜缓冲液；（4）凝胶聚合不均匀，建议重新制胶。

Q2：电泳后条带数量少于预期，缺失某些条带？

A2：（1）确认是否误用于SDS-PAGE，本产品仅适用于非变性电泳；（2）上样量过低，适当增加上样量至5-8μL；（3）染色液灵敏度不足或染色时间过短，延长染色时间或更换新鲜染色液。

Q3：本产品能否用于Western Blot？

A3：不建议使用。本产品所含蛋白在非变性条件下保持天然构象，转膜效率不稳定，且不同蛋白与膜的结合能力差异较大，可能导致条带不全或信号不均。如需Western Blot分子量参照，请选用预染蛋白Marker。

Q4：目的蛋白分子量在本Marker范围之外怎么办？

A4：本产品覆盖66-669kDa。若目的蛋白小于66kDa，建议选用低分子量范围的非变性Marker；若大于669kDa，建议选用超高分子量Marker或采用不同凝胶浓度下Rf值外推法估算。

Q5：电泳后440kDa和669kDa条带间距过近，难以区分？

A5：这是高分子量区域Native-PAGE的常见现象。建议：（1）降低分离胶浓度至6%，增大孔径；（2）适当延长电泳时间；（3）降低电泳电压至100-120V，改善分辨率。

Q6：使用银染时Marker条带过浓，遮蔽了样品信号？

A6：银染灵敏度远高于考马斯亮蓝。使用银染时建议将本产品稀释50倍后上样，或将Marker与样品分道上样，避免干扰。

产品声明

1. 用途限制：本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断、治疗、食品、药品或存放于普通住宅内。

2. 实验风险告知：由于科研实验本身具有探索性、未知性和多变量特性，若实验涉及珍贵样本，请务必自行开展小规模预实验，确认本产品效果满足实验要求后，再应用于大批量关键实验。

3. 售后范围：本产品售后服务仅限产品本身质量问题，对于因使用本产品造成的任何间接损失、样本损耗或数据偏差，本公司不承担任何连带责任。购买即视为同意此条款。

4. 安全操作：为了您的安全与健康，操作时请穿实验服并佩戴一次性手套和口罩。